白念珠菌粘附素的分离纯化及其在介导与宿主细胞粘附中的作用

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1、白念珠菌粘附素的分离纯化及其在介导与宿主细胞粘附中的作用白念珠菌粘附素的分离纯化及其在介导与宿主细胞粘附中的作用中华皮肤科杂志1998年第5期第31卷论著作者：刘晓红　廖万清　胡惠民　姚志荣　王君松　赵子卿单位：271000泰安，济南军区第八十八医院皮肤科(刘晓红　王君松　赵子卿)；第二军医大学附属长征医院(廖万清　姚志荣)；第二军医大学生化教研室(胡惠民)关键词：白念珠菌；纤连蛋白；粘附【摘要】　目的　从分子水平探讨白念珠菌(简称白念)与宿主细胞的粘附机制。方法和结果　用非离子去垢剂辛基吡喃葡萄糖苷提取白念孢子壁蛋白质，然后制备纤连蛋白Sepharose4B亲和柱

2、，运用亲和层析技术从上述提取液中分离纯化纤连蛋白粘附素，在非还原状态进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，得到表观分子量60000和105000的二条蛋白带。为了弄清此蛋白在白念与宿主细胞粘附中的作用，把人颊粘膜上皮细胞与白念孢子共同振荡孵育2小时，显微镜下测定上皮细胞表面粘附白念的数目，白念与上皮细胞的粘附百分率为44.7±6.28，上皮细胞经纤连蛋白粘附素预处理后，粘附百分率为28.3±6.18，P＜0.01。结论　纤连蛋白粘附素介导了人颊粘膜上皮细胞与白念的粘附。IsolationandPurificationofAdhesinofCan

3、didaAlbicansanditsEffectonAdherencetoHostCellsLiuXiaohong,LiaoWangqing,HuHuiming,etal.DepartmentofDermatology,Eighty-eighthHospitalofJinanMilitaryAreaCommand,Taian271000【Abstract】　Objective　ToinvestigatetheadherencemechanismofCandidaalbicanstohostcellsinmolecularlevel.MethodsandResults

4、　YeastcellwallproteinofCandidaalbicanswereextracted,andpurifiedfibronectin(Fn)adhesinwasobtainedfromyeastcellwallextract.Fnadhesinwasanalyzedbysodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis(SDS-PAGE),themolecularweightsofFnadhesinwere60kdand105kd.Inordertofindouttheeffectofthepr

5、oteinonadherencetohostcells,humanbuccalepithelialcellsandCandidaalbicanscellswereincubatedat37℃for2hoursonarotator,andyeastsadheringtothesurfacesofepithelialcellswereassayedmicroscopically.TheadherencerateofC.albicanstobuccalepithelialcellswas44.7±6.28%,andaftertreatingtheepithelialcel

6、lswithFnadhesin,theadherenceratereducedto28.3±6.18%,P＜0.01.Conclusion　TheresultsindicateFnadhesincouldmediateadherenceofCandidaalbicanstoepithelialcells.【Keywords】　Candidaalbicans　Fibronectin　Adhere白念珠菌(白念)是重要的条件致病菌，可侵犯皮肤、粘膜和内脏。研究表明白念与宿主细胞间的粘附是其侵入宿主引起感染的前提，在介导白念与宿主细胞的粘附中，纤连蛋白(Fn)起了重要作用

7、［1］。我们运用Fn做亲和配体，用亲和层析技术从白念孢子壁蛋白提取液中成功地分离纯化了Fn粘附素，而且验证了其能介导人颊粘膜上皮细胞与白念的粘附。材料和方法一、材料1.白念为长征医院皮肤科中国医学真菌保藏管理中心提供，为临床分离的菌株D67，血清型A型。2.试剂来源：Fn、溴化氰活化的Sepharose4B、辛基吡喃葡萄糖苷、抑胃肽A、苯甲基磺酰氟、牛血清白蛋白均购自Sigma公司，199细胞培养液为日本进口，低分子标准蛋白购于上海东风生化试剂厂。二、方法1.白念孢子的培养、收集［2］：取新鲜转种至葡萄糖蛋白胨培养基上的白念一铂环接种于YEPD培养基中，26℃振