马铃薯m病毒重组cp抗血清的制备本科论文.doc

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1、青岛农业大学毕业论文（设计）题目：马铃薯M病毒重组CP抗血清的制备姓名：学院：生命科学学院专业：生物技术班级：2010级3班学号：20103581指导教师：郭宝太（教授）完成时间：2014.6.152014年6月15日目录摘要1Abstract.2引言31材料与方法51.1实验材料51.1.1实验菌株51.1.2主要试剂与仪器51.1.3培养基51.1.4主要试剂配方51.2方法81.2.1PVM-CP基因原核表达的诱导与鉴定81.2.2菌体总蛋白的提取和包涵体的溶解81.2.3PVM重组CP的纯化91.2.4纯化蛋白的SDS-PAGE检测91.2.5蛋白的透析

2、、浓缩与定量91.2.6PVM重组CP抗血清的制备91.2.7PVM的ELISA测定102结果与分析102.1目的蛋白的诱导表达与纯化102.2蛋白的透析、浓缩与定量112.3抗血清效价的测定122.4PVM的ELISA测定133讨论133.1马铃薯病毒的检测方法133.2目的蛋白的纯化与定量143.3重组CP途径与本研究的创新点143.4马铃薯病毒抗血清的生产与应用致谢15参考文献15马铃薯M病毒重组CP抗血清的制备生物技术专业刘扬指导教师郭宝太摘要：用IPTG诱导重组菌BL21(pET22b-PVM)中马铃薯M病毒CP基因的原核表达，在总蛋白SDS-PAGE

3、图谱上有一条分子量36kDa的特异蛋白带，符合预期大小，结果表明PVM-CP基因的原核表达非常成功。用溶菌酶方法首先提取细菌总蛋白，然后利用镍离子亲和层析纯化重组蛋白，获得了高纯度的PVM重组CP。利用高纯度重组CP免疫家兔制备出了抗血清，间接ELISA法测定显示抗血清的效价为1：64K。制备的抗血清与PVM阳性物呈阳性反应，也就是说本研究制备的抗血清具有检测PVM的能力。本研究利用重组CP制备出了PVM高滴度的抗血清，为进行PVM的ELISA检测奠定了基础，同时也为PVM的ELISA试剂盒的组装与应用奠定了基础。关键词：马铃薯M病毒；CP基因；原核表达；重组C

4、P；抗血清制备16PreparationofantiserumagainstrecombinantcoatproteinofpotatovirusMStudentmajoringinbiotechnologyLiuYangTutorGuoBaotaiAbstract:TherecombinantbacteriumstrainBL21(pET22b-PVM)wasinducedbyIPTG,a36KDspecificproteinbandwasfoundintheSDS-PAGEpatternoftotalprotein,itssizewasthesameasex

5、pected,theresultshowedthattheprokaryoticexpressionofCPgeneofpotatovirusM(PVM)wassuccessful.TotalcellularproteinoftherecombinantbacteriumwasextractedbylysozymemethodandthenthePVMrecombinantCPwaspurifiedwithnickelironaffinitychromatographycolumn.Antiserumwaspreparedbyinjectionofrabbits

6、withthehigh-purityrecombinantCP.IndirectELISAdetectionindicatedthatthetiteroftheantiserumwas1:64K.PositivereactionwasobservedbetweenthepreparedantiserumandPVMpositivesampleinID-ELISA.TheantiserumpreparedinthisresearchhastheabilitytodetectthePVM.Inthisresearch,hightiterantiserumofPVMw

7、aspreparedbytheuseofrecombinantCP,ithaslaidthefoundationfortheELISAdetectionofPVM,andalsolaidthefoundationfortheassemblyandapplicationofELISAdetectionkitforPVM.Keywords:potatovirusM;coatprotein(CP)gene;prokaryoticexpression;recombinantCP;preparationofantiserum16引言马铃薯(Solanumtuberosum

8、L.)是茄科茄属的一年生