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《蝗虫精氨酸激酶的活性中心及其抑制剂的研究（可编辑）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、山东农业大学硕士学位论文蝗虫精氨酸激酶的活性中心及其抑制剂研究姓名:朱雯静申请学位级别:硕士专业:生物化学与分子生物学指导教师:王晓云20080525英文缩略表缩略词中文全称英文全称二磷酸腺苷精氨酸激酶三磷酸腺苷肌酸激酶二甲基亚砜二乙氨基.乙基.葡聚糖?,’.二硫硝基苯甲酸,’一二硫苏糖醇乙二胺四乙酸半抑制率常数%木犀草素聚丙烯酰胺凝胶电泳苯乙二醛十二烷基磺酸钠槲皮素关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文,是在导师指导下,独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体
2、,均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定,同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或●●其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名,.蒜重鸯导师签名:碱幺日期:Ⅻ、.矿山东农业大学硕士学位论文蝗虫精氨酸激酶的活性中心及其抑制剂研究研究生:朱雯静指导教师:王晓云教授业:专生物化学与分子生物学
3、摘要精氨酸激酶,...是磷酸原激酶的一种,广泛地存在于无脊椎动物中,是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、再生有直接关系的重要激酶。由于仅存在于无脊椎动物中,与脊椎动物中参与能量代谢的肌酸激酶不同,因此可以作为控制昆虫的一个很好的靶标。本研究以蝗虫精氨酸激酶为研究对象,利用化学修饰法研究活性中心的必需基团,并以黄酮类物质筛选有效的抑制剂。本试验的主要结果如下:.精氨酸激酶活性中心半胱氨酸的研究:使用对精氨酸激酶半胱氨酸进行化学修饰,结果发现随修饰剂浓度增加,精氨酸激酶的活性逐渐丧失,这表明半胱氨酸位于该酶的活性中心部位。采用邹
4、氏作图法求得该酶活性中心必需半胱氨酸残基的数目为。利用还原被修饰的精氨酸激酶推测这个必需半胱氨酸残基的位置及作用,结果显示这个半胱氨酸有可能位于的结合位点附近。.精氨酸激酶活性中心精氨酸的研究:通过测定酶活性解离基团的性质,发现蝗虫精氨酸激酶活性中心标准解离热焓为./,表明该酶的活性中心的可解离基团是精氨酸的侧链胍基。又以苯乙二醛为专一的修饰剂作用于蝗虫精氨酸激酶的精氨酸残基,根据等的方法求得每个酶分子中仅有一个精氨酸是酶活性所必需的。通过考察底物对苯醛修饰的保护作用,结果发现对苯乙二醛修饰该酶存在保护作用,蝗虫精氨酸激酶
5、的活性中心及其抑制剂研究这表明该精氨酸可能位于的结合位点附近。.精氨酸激酶抑制剂效果的研究:黄酮类物质对体内和体外的精氨酸激酶都有一定的抑制效果。对龄蝗虫喷洒槲皮素和木犀草素六天后,提取精氨酸激酶测活发现酶活力仅为原来的.%和.%;在体外实验中当槲皮素和木犀草素的浓度达到/时,酶活性分别下降了.%和.%。并进一步通过双倒数作图确定了槲皮素和木犀草素对精氨酸激酶的抑制类型和抑制常数。.精氨酸激酶抑制剂机理的研究:利用猝灭对抑制机理进行研究。确定槲皮素和木犀草素与精氨酸激酶发生静态猝灭,说明槲皮素和木犀草素与精氨酸激酶能相互结
6、合并结合在色氨酸周围。利用.法求得其结合常数和结合位点。根据非辐射能量转移机理,分别求算了槲皮素和木犀草素与精氨酸激酶之间的距离,并根据热力学参数推测了槲皮素和木犀草素与精氨酸激酶相互作用力是静电作用力。根据猝灭结果和抑制效果,推测槲皮素和木犀草素对精氨酸激酶的抑制活性的不同很有可能是由于结构上的差异引起的。关键词:蝗虫;精氨酸激酶;活性中心;抑制作用:?::;...;:?,.也∞,.,,.::.。’.,.,..【./,..蝗虫精氨酸激酶的活性中心及其抑制剂研究..,:,.,...:,.’...;;;:;山东农业大学硕士学
7、位论文引言.精氨酸激酶的研究背景精氨酸激酶,...是磷酸原激酶的一种,主要存在于无脊椎动物体内,如昆虫、虾、蟹及软体动物中..,;,;;,;,。它的作用是催化如下反应:将上的磷酸基团转移到精氨酸上,从而生成和一种具有高能键的储能分子??磷酸精氨酸,该反应需要二价金属离子如矿、参与,反应方程式如下:一:?‘?磷酸原激酶家族是一个保守家族,可逆催化肌酸或精氨酸与之间的转磷酰基反应,反应形成的高能磷酸化的磷酸肌酸或磷酸精氨酸称为磷酸原。高能磷酸原在能量储备方面起关键作用,因为当需要再生时,可以在磷酸原激酶的催化下由磷酸原转化而来
8、。磷酸原不仅是一个能量储备库,同样在不断耗能的体系中它也是一个能量传送体.,。一般认为磷酸原及磷酸原激酶具有方面的生物功能:起能量暂时缓冲作用;起空间能量缓冲作用;提高氧化磷酸化的效率。能量的缓冲指的是当的消耗量超过线粒体产生的量时,由磷酸原激酶催化磷酸原形成;空间能量的缓冲指的是来源于心肌细胞等的一些
