雄性生殖细胞特异性表达gfp小鼠的繁殖及其表型鉴定

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1、雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定王志茹[作者简介]王志茹（1988-）女，在读硕士研究生，研究方向：纳米毒理学，Email：843872569@qq.com[通讯作者]朱德生(1960-)男，高级工程师，研究方向：转基因动物，Email：deshengz@pku.edu.cn,2，李军2，刘晓梅1，吴红联2，朱德生2（1.吉林大学公共卫生学院，长春130021；2.北京大学实验动物中心，北京100871）【摘要】目的繁殖雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白（GFP）小鼠，为进行小鼠生殖系统毒性研究提供有效的工具

2、。方法将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配，产生子代动物，利用分子生物学、组织病理学及活体成像等技术，分别从分子、细胞和组织水平对子代及其亲代小鼠进行表型鉴定。结果PCR结果表明在子代小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组；活体成像可以看到在F1代小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达；睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠繁殖成功。【关键词】睾丸；特异性；基因重组；GFPProductionand phenotyp

3、eidentificationof specificexpressedgreenfluorescent proteininmalemicegermcellsWANGZhi-ru1,2，LIJun2，LIUXiao-mei1，WUHong-lian2，ZHUDe-sheng2(1.Schoolofpublichealth，JilinUniversity，Changchun130021，China；2.PekingUniversityLaboratoryanimalcentre，Beijing100871，China)【Abstr

4、act】ObjectiveTheaimofthisstudyisproductionoforganspecificanimalmodelforstudyingreproductivetoxicityinmice.MethodsF1generationwasgottenbymatingtheDdx4-cretransgenicmalemicewiththeRosa26mT/mGtransgenicfemalemice.F1offspringanditsparentsphenotypewasscreenedbymolecularb

5、iological,histopathologicalandinvivoimagingtechnology.ResultsAtmolecularlevel,specificDNAfragmentwasonlyfoundintestisofF1offspring;Attheorganlevel,theexpressionofgreenfluorescentproteincouldonlybeobservedintestisofF1offspring;Testicularfrozensectionsandspermfluoresc

6、enceobservationshowedthatgreenfluorescentproteinweremainlyexpressedinthegermcelllineagesuchassecondaryspermatocyteandspermatocyteandspermatozoon.ConclusionsTheproductionofthemicewithspecificgermcellexpressedgreenfluorescentproteinbyCre/loxPrecombinationsystemwerebui

7、ltsuccessfully.【Keywords】Testis;Specificity;Generecombination;Greenfluorescent protein生殖系统的改变是造成不孕不育的重要原因，如何简易快速的检测生殖系统的损伤是目前研究的一个热点。在绝大多数物种中，Ddx4基因特异性表达于生殖细胞中[1]，常被用作分子标记研究配子发生和原始生殖细胞的起源、迁移、分化等方面。雄性生殖细胞的DDX4蛋白表达，从12.5dpc生殖嵴一直持续到减数分裂后的精子细胞[2]。本研究利用生殖系统特异性启动子Ddx4启动的C

8、re酶，通过Cre/loxP位点特异性重组系统[3]产生雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠模型，为后续进行雄性小鼠生殖系统发育和毒性研究提供理想的动物模型。1材料与方法1.1实验动物SPF级B6.FVB-Tg(Ddx4-cre)1Dcas/JnjuDdx4-cre小鼠（以下简称