枯草芽孢杆菌hs-a38产抗菌脂肽bacillomycin d的组分分析及鉴定

《枯草芽孢杆菌hs-a38产抗菌脂肽bacillomycin d的组分分析及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、枯草芽孢杆菌HS-A38产抗菌脂肽BacillomycinD的组分分析及鉴定枯草芽孢杆菌HS-A38产抗菌脂肽BacillomycinD的组分分析及鉴定刘佳欣，丛丽娜*，李成，董亮，张永吉，齐建权大连工业大学生物工程学院，辽宁大连116034摘要：对一株枯草芽孢杆菌HS-A38产生的脂肽类物质进行分离鉴定及抑菌活性研究。通过酸沉淀分离和有机溶剂抽提的方法，从枯草芽孢杆菌HS-A38发酵液中得到脂肽粗提物LP，产率为1.956g/L。利用薄层色谱和茚三酮染色法确定该脂肽粗提物中存在四个组分，分别为LP1，LP2，LP3和LP4；抑菌活性检测显示，

2、组分LP3对两株海洋致病菌副溶血性弧菌和铜绿假单胞杆菌的活性较高。组分LP3经硅胶柱层析纯化分离后，应用反相高效液相色谱（RP-HPLC）和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对该组分做进一步纯化和鉴定。分析表明，LP3样品在保留时间20~28min产生单峰团LP3-1，其纯度为85.24%；经MALDI-TOF-MS分析和数据比对，组分LP3-1中的主要成分为杆菌霉素BacillomycinD。关键词：枯草芽孢杆菌；脂肽类物质；分离纯化；抑菌活性枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是一种嗜温、好氧、产芽孢的

3、杆状细菌，该菌在自然界中广泛存在，无毒无害不污染环境，能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力[1]。自1945年———————————————————————————————————————————————Johnson[2]等报道枯草芽孢杆菌产生抗菌物质后，半个多世纪以来人们从枯草芽孢杆菌的不同菌株中发现了60多种抗生素。枯草芽孢杆菌作为有效益生菌产生的抗菌物质大多为低分子抗菌脂肽（Lipopeptide）[3]。因其独特的化学组成和两亲性的小分子肽结构，具有低抗药性、低毒、抗菌谱广、热稳定性高、生物可降解等优点[4,5]，是

4、一类绿色、安全、高效的抗生素替代品，又称为脂肽类抗生素。枯草芽孢杆菌产抗菌脂肽，主要有伊枯草菌素（Iturin）、表面活性素基金项目：辽宁省自然科学基金项目（201602047）；国家海洋公益性行业科研专项项目(201405003)；辽宁省教育厅重点实验室（LZ2014029）作者简介：刘佳欣（1992~），女，硕士研究生。E-mail：liujiaxin_forever@163.com联系电话：18842634070通讯作者：丛丽娜（1962~），女，教授。E-mail：linacong@163.com-1-（Surfactin）、芬荠素（F

5、engycin）三大环肽家族，其中伊枯草菌素是由枯草芽孢杆菌产生的一大类脂肽类化合物，家族成员包括IturinA、B、C、D、E，杆菌霉素(Bacillomycin)D、F、L以及抗霉枯草菌素(Mycosubtilin)等[6]。这些抗菌脂肽的共同特征是分子量较小，约1kD左右，含有D，L-构型氨基酸和β-脂肪酸等一些特殊结构。因为氨基酸呈环状排列，所以称为环脂抗菌肽[7]。JasimB等[8]从枯草芽孢杆菌BmB9———————————————————————————————————————————————发酵液中提取出三大环肽家族物质。目前

6、抗菌脂肽的研究主要集中在三大环肽家族，而对于其他同系物的报道相对较少。其中，杆菌霉素BacillomycinD属于Iturin家族的结构类似物，与Iturin家族相比，其氨基酸组成差异较大。Aranda等[9]认为伊枯草菌素与真菌细胞膜的磷脂双分子层相互作用，可形成伊枯草菌素聚合物或形成脂肽－磷脂、脂肽－磷脂－甾醇聚合物，使细胞膜离子通道通透性增加，导致细胞内容物的释放，从而引起真菌细胞的生长抑制或者死亡，因此BacillomycinD不仅抑制细菌的生长还可以抑制真菌的生长。本文所用枯草芽孢杆菌（B.subtilis）由本实验室分离于大连渤海海

7、域刺参肠道中，通过进一步研究发现，其产生的活性物质具有广谱抗菌活性，尤其对水产养殖中的致病菌，革兰氏阴性菌如铜绿假单胞杆菌，副溶血性弧菌均有很好的抑制作用。结合薄层色谱（TLC）、硅胶柱层析和反相高效液相色谱（RP-HPLC）对发酵液提取物LP进行分离提取活性最强组分LP3-1，进一步通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对分离得到的LP3-1进行分析，经鉴定其主要成分为杆菌霉素BacillomycinD。1材料与方法1.1材料1.1.1菌株实验菌株为枯草芽孢杆菌（B.subtilis）HS-A38由本实验室分离筛选并

8、保藏。供试指示菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、溶壁微球菌（Micrococcuslysodeikticus———————