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《宁夏枸杞八氢番茄红素合成酶基因的克隆与序列分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、宁夏枸杞八氢番茄红素合成酶基因的克隆与序列分析第42卷第5期2006年5月林业科学SCIENTIASILVAESINICAEVo1.42,No.5May,2006宁夏枸杞八氢番茄红素合成酶基因的克隆与序列分析郑阳霞季静王罡杨婉身(1.天津大学农业与生物工程学院天津300072;2.四川农业大学生命科学与理学院雅安625014)关键词:宁夏枸杞;八氢番茄红素合成酶基因;克隆中圈分类号:$718.46;Q943.2文献标识码:A文章编号:1001—7488(2006)05—0138—04CloningandSequenceAn
2、alysisofPhytoeneSynthasecDNAfromLyciumbarbarumZhengYangxia'.JiJingWangGangYangWanshen(t.CollegeofAgricultureandBiotechnology,Tia~inUniversityTiara'in300072;2.CdlegeofBiologyandScience,SichuanAgriculturalUniversityn625014)Abstract:Anovel1.3kbcDNAwasamplifiedfromeDN
3、AlibraryofLyciumbarbarumbyPCR.ThiseDNAclonewasfurtherinsertedintopGEM-T.ThesequeneeanalysisshowedthatthecDNAwasI292bplongwithanopenreadingframeof1275bp,andencodedapolypeptideof425animoacids.ItscDNAsequenceshowed75%一80%identity.andtheaminoacidsequenceshared70%～80%i
4、dentitywiththoseofPSYfromLycopersiconesculentum,Capsicumannuum,ArabidopsisthalianaandZeamaysrespectively.indicatingthatthefull-lengthPSYcDNAwasisolatedfromL.barbarum.Keywords:Lyciumbarbarum;phytoenesynthase;cloning类胡萝卜素是植物叶绿体光合作用的辅助色素,并能保护叶绿素免受高温强光的破坏(Bartleyeta1.
5、,1995).现在越来越多的医学研究表明,类胡萝卜素与人类健康密切相关.约有10%的类胡萝卜素是维生素A的前体(Krinsky,1989).据统计,每年有70多个国家的3000多万儿童因缺乏维生素A而造成致命性疾病(Cheryleta1.,1997).此外,类胡萝卜素在防癌抗癌,预防心血管疾病,增强人体免疫力等方面起着重要的作用(陶俊等,2002).通过对菲律宾,加拿大和中国的食道癌患者的调查已证明J3一胡萝卜素能延缓疾病的进程(韩雅珊,1999).由于类胡萝卜素在许多植物中含量较低,并且难以用化学方法合成.因此,利用基因
6、工程手段调控类胡萝卜素的代谢积累,进而大量生产类胡萝卜素已成为研究者们所共识的研究方向之一.目前通过基因工程手段已获得转类胡萝卜素合成酶基因的"金大米"和"金油菜"(陶俊等,2002).植物体内类胡萝卜素均通过异戊二烯化合物或萜类化合物合成.代谢主链上有5种酶参与,分别是八氢番茄红素合成酶(PSY),八氢番茄红素脱饱和酶(PDS),毒一胡萝卜素脱饱和酶(ZDS),番茄红素一环化酶(LycB)和番茄红素￡一环化酶(LycE).随着分子生物学研究手段的发展,编码这些酶的基因已从番茄(Lycopersiconesculentum
7、),烟草(Nicotianatabacum),辣椒(Capsicumannuum),拟南芥(Arabidopsisthaliana),玉米(Zeamays)等植物中陆续分离鉴定(陶俊等,2002;Cunninghameta1.,1998).据报道宁夏枸杞(Lyciumbarbarum)的总类胡萝卜素含量为2.9527mg?g(李忠等,1999),其含量之高为植物所罕见.目前有关枸杞类胡萝卜素合成酶基因的克隆还未见报道.因此选择宁夏枸杞作为试验材料,进行八氢番茄红素合成酶基因(phytoenesynthase,PSY)的克隆
8、,可为进一步利用基因工程手段生产类胡萝卜素奠定基础.l材料与方法1.1材料质粒载体pGEM—Tvectorsystem为Promega公司产品,TaqDNA聚合酶,dNTP和DNAmarker2000购自大连宝生物工程有限公司,X—gal和IPTG为北京鼎国生物技术有限责任公司产品,其他化学常规试剂为国
