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1、萍乡红鲫论文：萍乡红鲫ZP3蛋白组织差异性表达及其在卵母细胞中免疫荧光定位【中文摘要】萍乡红鲫(Pingxiangred-transparentcruciancarp,Carassiusauratusvar.Pingxiangnensis)主要分布于江西省萍乡地区,是三倍体野生鲫鱼的一种突变种。因其通体呈肉红色、透明而得名肉红鲫,是一种集食用和观赏价值于一体的鲫鱼品种,在2008年被国家水产原良种委员会审定为新的养殖品种-萍乡红鲫。萍乡红鲫可以行雌核发育和两性生殖两种生殖方式。本论文主要包括以下三部分：一、利用RACE-PCR技术克隆得到萍乡红鲫ZP3基因cDNA全长序列,该序列
2、全长1385bp,有一个1308bp的完整开放阅读框,编码435个氨基酸,经过氨基酸序列比对,121-376位氨基酸残基属于ZP家族domain超家族结构域。二、利用荧光定量PCR的方法检测了ZP3基因在萍乡红鲫卵巢、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、脑等组织中的差异性表达,相对定量分析结果显示ZP3基因在肝脏中表达量最低,在卵巢组织中的表达量显著多于其他五个组织,约是肝脏中的26656倍,除卵巢组织外,ZP3基因在所检测的其他五个组织中都有微量的表达。三、将纯化好的ZP3蛋白作为抗原免疫白兔,制备得到了多克隆兔抗鱼ZP3蛋白血清。用Elisa间接法检测了抗血清的效价。将得到的抗血清用于卵
3、母细胞冰冻切片免疫荧光定位实验。Elisa实验结果显示：抗血清效价约为25600且抗血清的特异性良好。免疫荧光实验结果显示：在早期发育的卵母细胞中,就有少量的ZP3蛋白存在,随着卵母细胞的发育,ZP3蛋白的合成累积量逐渐增加。在V时相的卵母细胞中,ZP3蛋白在卵母细胞细胞膜上和细胞质中的存在量达到了最大。ZP3蛋白在精卵识别的过程中起到了关键作用。本研究为进一步了解萍乡红鲫ZP3蛋白在受精时的具体功能,提供了一点分子生物学方面的数据。【英文摘要】Pingxiangred-transparentcruciancarp,Carassiusauratusvar.Pingxiangnen
4、sis,mainlydistributedinPingxiangcityofJiangXiProvince,isatriploidwildnesscruciancarpmutant.Foritswholetransparentbody,itwasnamedCarassiusauratusvar.Pingxiangnensis.Thefishisagoodcruciancarpspecieforediblevalueandornamentalvalue,anditisapprovedbynationalaquaticoriginalimprovedvarietycommitteea
5、sanewculturalfishspeciein2008.Carassiusauratusvar.Pingxiangnensishastwomodesofreproduction,whichincludesbi-sexualandgynogeneticreproductivemode.Thecontentofthisresearchincludesthreeparts:First:TheZP3cDNAsequencefromCarassiusauratusvar.PingxiangnensisisclonedbythemethodofRACE-PCR.Itsfulllength
6、is1385bp,andanORFis1308bpforencodingapeptideof435aa.Byblastingofaminoacidsequence,aminoacidresiduefrom121to376aabelongstoZPfamilydomains.Second:TheZP3mRNAexpressionlevelsofdifferenttissuesinCarassiusauratusvar.Pingxiangnensisaredetectedbythetechnologyofreal-timePCR.Thetissuesincludeheart,live
7、r,spleen,kidney,brainandovary.TheresultsofrelativequantitativeanalysisshowthatmRNAexpressionintheliverwasthelowest,andtheovarypossesmorehigherexpressionlevelthanothertissues.TheZP3mRNAexpressionintheovaryisabout26,656timesasmuchasintheliver.E
