第二章提取分离鉴定的方法和技术4

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1、商洛职业技术学院教案课程名称天然药物化学专业班级06药学授课教师顾晓燕授课类型讲授学时2章节题目第二节天然药物化学成分分离、精制、鉴定的方法与技术（三）目的与要求1、掌握离子交换色谱、大孔吸附色谱、凝胶色谱、高效液相色谱的分离原理、技术及应用2、熟悉渗透法、升华法及分馏法的分离原理及应用重点与难点重点：操作技术难点：原理方法与手段讲授＋实验使用教材及参考书《天然药物化学》主编：吴剑锋人民卫生出版社《天然药物化学学习指导》主编：吴剑锋人民卫生出版社教案续页教学内容辅助手段时间分配第二节天然药物化学成分分离、精制、鉴定的方法与技术（三）（三）离子交换色谱法具有酸性、碱性

2、、两性基团的化合物在水中多呈解离状态，据此可用离子交换法进行分离。1、原理：离子交换原理2、离子交换树脂的选择根据交换基团不同分为：①阳离子交换树脂强酸性（—SO3-H+）弱减性（—COO-H+）②阴离子交换树脂强碱性[—N+（CH3）3Cl]弱减性（—NH2及仲胺、叔胺基）3、操作方式固定相：离子交换树脂流动相：水或含水溶剂洗脱液：强酸性阳离子交换树脂（H型）——稀氨水洗脱强碱性阴离子交换树脂（OH型）——稀氢氧化钠洗脱操作步骤：①树脂的预处理②装柱③上样④洗脱⑤再生应用：①用于不同电荷离子的分离，如水提取物中的酸性、碱性、两性化合物的分离。②用于相同电荷离子的分

3、离，如同为生物碱，但碱性强弱不同，仍可用离子交换树脂分离。（四）大孔吸附树脂法通常分为极性和非极性两类。1、基本原理：吸附性和分子筛性相结合。吸附性是由范德华引力或氢键引起的。分子筛是由于其本身多孔性结构产生的。2、影响分离因素：①一般非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，极性化合物在水中易被极性树脂吸附。糖是极性水溶性化合物，与D型非极性树脂吸附作用很弱。②物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就小，反之就大。③溶剂的影响3、操作方式①树脂的预处理②装柱和上样③洗脱洗脱液的选择：洗脱液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。最常用的是乙醇—水④树脂柱的清洗⑤树脂

4、的再生4、应用：广泛应用于化合物的分离与富集工作中。如：苷类与糖类的分离，生物碱的精制，多糖、黄酮、三萜类化合物的分离等。（五）凝胶过滤法：1、基本原理：分子筛原理。即利用凝胶的三维网状结构的分子筛的过滤作用将化合物按分子量大小不同进行分离。2、凝胶的种类与性质：种类很多，常用的有以下两种：①葡聚糖凝胶（Sephadex-G）：只适用于水中应用，且不同规格适合分离不同分子量的物质。②葡聚糖凝胶LH－20（SephadexLH-20）：为SephadexG-25经羟丙基化后得到的产物，具有以下两个特点：具有分子筛特性，可按分子量大小分离物质；在由极性与非极性溶剂组成的

5、混合溶剂中常常起到反相分配色谱的作用，适合于不同类型有机物的分离。3、操作方式①装柱②加样③洗脱④再生（六）高效液相色谱也称高压液相色谱、高速液相色谱法，实在经典液相色谱的基础上发展起来的一种高效、快速、高灵敏的色谱分离法。由于采用了高效填充剂，并配以高压输液泵、高灵敏检测器、自动记录装置及制动收集装置，使高效液相色谱法的分离速度及效率均大大提高，更趋于仪器化、自动化。1、分类快速柱色谱（约2.02´105Pa），Lobar低压柱色谱（<5.05´105Pa），中压柱色谱（5.05~20.2´105Pa），一般分析用HPLC，制备

6、用HPLC（>20.2´105Pa）。固定相：RP—2、RP—8或RP—18流动相：水—甲醇或水—乙腈洗脱顺序：化合物极性越大，越先出柱；反之，化合物极性越小，越后出柱。2、应用：通常用于分离水溶性或极性较大的成分，如苷类、酚性化合物等。根据物质分子大小进行分离六、膜过滤法：概念：膜过滤法是一种用天然或人工合成的膜，以外界能量或化学位差为推动力，对双组分或多组分的溶质和溶剂进行分离、分级、提纯或富集的方法。分类：膜过滤技术主要包括渗透、反渗透、超滤、电渗析、液膜技术等。透析法：是膜过滤法中的一种。（1）原理：透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜、而

7、大分子物质不能透过半透膜的性质，以达到分离的目的，本质上是一种分子筛作用。（2）应用：对于生物大分子，一般可以通过透析法进行浓缩和精制。如药用酶的精制。分离和纯化皂苷、蛋白质、多肽、多糖等大分子物质，可将其留在半透膜内，而将如无机盐、单糖、双糖等小分子的物质透过半透膜，进入膜外的溶液中，而加以分离精制。七、升华法根据某些固体物质具有在低于其熔点的温度下受热后，不经融化就直接转化为蒸气，遇冷后又凝固为原来的固体性质，使其与其他固体分离的方法。八、根据物质的沸点进行分离——分馏法1、概念：分馏法是利用中药中各成分沸点的差别进行提取分离的方法。一般情况下，液体混合物沸