黄酮类化合物分离方法研究进展

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1、黄酮类化合物分离方法研究进展摘 要：综述了黄酮类化合物分离方法研究进展，为黄酮类化合物研究提供参考。关键词：黄酮类化合物；分离。黄酮类化合物属于植物次级代谢产物，广泛存在于维管植物中，到目前为止已发现5000多种植物中含有黄酮类化合物[1]。黄酮类化合物分为许多不同类型，包括黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢异黄酮、查尔酮等化合物[2]。黄酮类化合物具有降低血管脆性及异常的通透性、降血脂、降血压、抑制血小板聚集及血栓形成、抗肝脏病毒、抗炎、抗菌、解栓[3]抗氧化、清除自由基、抗衰老[4]

2、、抗癌、防癌[5]、降血糖[6]、镇痛、免疫[7]等生理活性。这些生理活性引起了人们的高度重视，对该类化合物的研究已成为国内外医药界研究的热门课题。由于黄酮类化合物在人体内不能直接合成，只能从食物中获得[8]，所以近年来科学家都积极关注从植物体中分离纯度高、活性强的黄酮类化合物，因此对黄酮类化合物分离方法的研究具有重要意义。由于黄酮化合物的性质不同，其分离原理有：（1）极性大小不同，利用吸附能力或分配原理进行分离；（2）酸性强弱不同，利用pH梯度萃取进行分离；（3）分子大小不同，利用葡聚糖凝胶分子筛进

3、行分离；（4）分子中某些特殊结构，利用与金属盐络合能力的不同进行分离[9]。1．pH梯度萃取黄酮类化合物中有酚羟基的取代而显酸性，由于羟基的数目和位置不同，酸性强弱也不同，利用这一特性，将植物提取的总黄酮溶于有机溶剂中，依次按弱碱至强碱，从稀碱至浓碱水溶液的顺序进行萃取，就可以将黄酮按较强酸性至较弱酸性的顺序分别萃取出来。如将混合物溶于有机溶剂（如乙醚），依次用5%碳酸氢钠（萃取7，4’-二羟基黄酮）、5%的碳酸钠（萃取7-羟基黄酮或4’-2羟基黄酮）、0.2%氢氧化钠（萃取一般酚羟基黄酮）、4%氢氧

4、化钠（萃取5-羟基黄酮）萃取而使其分离[10]。2．柱色谱法2.1硅胶柱层析法。由于黄酮类化合物与硅胶有很强的吸附能力，难洗脱，而且与硅胶中很多金属离子络合而不能被洗脱，所以应预先用浓盐酸处理硅胶除去金属离子，以免干扰分离效果。硅胶柱层析主要用于分离极性较低的黄酮类化合物如异黄酮、黄烷类、二氢黄酮（醇）和高度甲基化或乙酰化的黄酮和黄酮醇，硅胶在降活后也可用于分离极性较大的黄酮类化合物，如甙类、多羟基黄酮类化合物[11]。杜欣等利用硅胶柱色谱法从毛泡桐花中分离获得5种黄酮类化合物[12]。2.2聚酰胺柱

5、层析法。聚酰胺是较为理想的吸附剂，适于在制备分离工艺中应用。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目、位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。但洗脱速度慢，死吸附较大，损失较高[13]。徐美奕等利用聚酰胺树脂柱层析，采用水和乙醇梯度洗脱，从紫荆花中分离出芦丁、槲皮素、山柰酚3种黄酮甙元[14]。2.3葡聚糖凝胶柱层析法。黄酮类化合物的分离，主要使用两种型号的葡聚糖凝胶：SephadexG型和SephadexLH-20型。其原理主要是吸附作用。凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取

6、决于游离羟基的数目，但分离黄酮苷时，分子筛的性质起主导作用。在洗脱时，黄酮苷类大体上是按相对分子质量由大到小的顺序流出柱体，分子量越大，连的糖基越多，越易洗脱[11]。周惠燕等联用SephadexLH-20和HPLC分离制备麦黄酮，效果良好[15]。2.4环糊精键合凝胶柱层析法。β环糊精是一种同时具有多羟基外周和疏水空腔的圆筒形分子，这样的结构赋予其既能和目标产物发生氢键作用，又能与其产生疏水作用的能力，同时，黄酮类化合物的结构一般包括疏水性的母核和其他亲水性的侧链基团（如糖苷和羟基等）。因此，黄酮类

7、化合物能够与环糊精配基同时发生氢键作用和疏水作用，从而为色谱分离过程提供保留力。谭天伟等利用环糊精键合凝胶介质分离纯化葛根素、表没食子儿茶素以及槲皮素、山奈酚和异鼠李素，效果良好[16]。3．薄层色谱法（thinlayerchromatography，TLC）薄层色谱是一种快速、简便、高效、经济、应用广泛的色谱分析方法。薄层色谱的特点是可以同时分离多个样品，分析成本低，对样品预处理要求低，对固定相、展开剂的选择自由度大，适用于含有不易从分离介质脱附或含有悬浮微粒或需要后衍生化处理的样品分析。常规的薄层

8、色谱法存在展开时间长、展开剂体积需求大和分离结果差等缺点[17]。离心薄层层析（CTLC）具有分离速度快、处理量大等优点，可以替代制备型薄层色谱，有时甚至能替代柱色谱[11]。张超等利用离心薄层层析从地菍中分离出槲皮素、广寄生苷和山柰酚[18]。4．高效液相色谱法（HPLC）HPLC正相系统的固定相有硅胶柱和氨基柱，反相系统的固定相有C18柱、C8柱、苯基柱、氨基柱及C2柱等。流动相一般用甲醇-水或乙腈-水系统，并加入少量的酸（乙酸、磷酸、甲酸及磷酸二氢