mtt法检测细胞存活率或抑制率详细步骤sop14

《mtt法检测细胞存活率或抑制率详细步骤sop14》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、广东药学院药科学院新药筛选与药效评价中心SOP14StandardOperationProtocol（SOP）l技术方法名称:MTT法检测细胞存活率或抑制率l基本原理:MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan

2、结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可用DMSO（分析纯）来溶解。利用酶标仪测定490nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。l试剂配制：MTT溶液：用pH=7.4的PBS配制成5mg/ml浓度的溶液，避光保存)lMTT法检测细胞存活率或抑制率详细步骤1接种细胞：用含10％胎/小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔103-105个细胞接种到96孔板，每孔体积100-200μl.2:培养细胞：同一般培养条件，培养1-2天（原代细胞不同，可根据试验目的和要

3、求决定培养时间广东药学院药科学院新药筛选与药效评价中心，神经元7-10天，心肌细胞8-14天）。3吸去原培养基，每孔加入以无血清培养基配制的不同浓度药物（原代细胞例外）。4培养24或48h后，每孔加MTT溶液（5mg/ml，用pH=7.4的PBS配制，避光保存)10-20μl.（每孔培养基为100μl，加10μl，每孔培养基为200μl，则加20μl）。537℃继续孵育4h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液（对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液）。6每孔加150ulDMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。7比色：选择4

4、90nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制曲线。l注意事项：（1）MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验时一般关闭超净台上的日光灯来避光比较好。（2）选择适当得细胞接种浓度。（3）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。广东药学院药科学院新药筛选与药效评价中心（4）吸取上清时，需格外小心，切勿吸出孔底的蓝色的formazan结晶。（5）空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，最

5、后比色以空白调零。（6）MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系.