中药沙棘提取液对血液肿瘤细胞杀伤作用探究

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1、中药沙棘提取液对血液肿瘤细胞杀伤作用探究【摘要】目的探讨中药沙棘提取液对人慢性髓样性白血病细胞（K562）、人急性粒细胞白血病细胞（HL-60）、小鼠T淋巴瘤细胞（YAC-1）肿瘤细胞的杀伤作用及其作用机理。方法利用不同浓度沙棘提取液与K562、HL-60、YAC-1肿瘤细胞体外培养24h，测定肿瘤细胞DNA合成能力及脱氧尿嘧啶核酸（UdR）释放率。结果受视药对HL-60、YAC-1细胞DNA合成有抑制作用，对K562细胞DNA中UdR有释放作用。结论沙棘提取液对血液肿瘤细胞生长有明显抑制作用，其药物机理可能与沙棘对其DNA合成的解聚作用和抑制合成作用有关。【关键词】沙棘提取液；DNA合成

2、；细胞毒沙棘［HippophaerhamnoideslHR］又名酸刺，具有活血化淤、化痰宽胸、补脾健胃、生津止渴等功效。目前有关沙棘对机体生物活性方面的研究较多[1-2]。本文主要研究沙棘提取液(HRJ)对K562、HL-60及YAC-1血液肿瘤细胞DNA合成及解聚作用的影响。现将研究结果报告如下。1材料和方法1．1沙棘提取液由吉林省肿瘤防治研究所提供，浓度为0．37g/ml(含生药)4℃保存。51．2细胞株K562；HL-60；YAC-1均由吉林省肿瘤防治研究所传代保存。1．3125I-UdR、3h-TdR由中国原子能科学研究院制造。1．4沙棘提取液(HRJ)对肿瘤DNA合成能力的测定取

3、经24h传代培养的肿瘤细胞，经离心洗涤后，用10%FCS-1640培养液(简写FCS-1640)调至细胞浓度为1×106/ml的细胞悬液。实验分用药组和对照组。用药组每支放免塑料管加入0．9ml含不同浓度沙棘汁的FCS-1640以及0．1ml的细胞悬液，对照组除不加药物外，其它相同。于37℃，5%CO2饱和湿度的CO2孵箱中培养1h，取出离心洗涤3次，每管加37kBq3h-TdR并用1640完全培养液调至1ml，37℃CO2孵箱内培养30min取出，用多头细胞收集器收获细胞，用Tri-Carb460CD型自动液闪计数仪测其cpm值，结果以3h-TdR掺入量的抑制百分率表示。1．5沙棘提取液

4、(HRJ)对K562细胞中UdR释放作用的测定传代24h的K562细胞，离心洗涤1次，用FCS-1640培养液调至1×106cell/ml的细胞悬液，取上述细胞悬液1ml，加入100μLFUdR(1×10-3mol/L，Hank’s液配制)，185kBq125I-UdR，于37℃，CO2孵箱内标记4h，标毕，用FCS-1640培养液洗净游离的同位素并调节细胞浓度至1×105cell/ml。用药组，每支放免塑料管取上述标记的K562细胞0．1ml5，分别加入不同浓度沙棘汁的FCS-1640培养液0．9ml。对照组除不含沙棘汁外，其余相同。然后放入37℃，CO2孵箱内培养16h，在终止培养前3

5、0min，加入DNA酶和胰酶双酶混合液200μL/管(0．05%DNA酶和0．25%胰酶各半)。培养结束取出，振荡，离心取上清液0．6ml至另一只放免塑料管内，用γ-射线自动计数仪测定各管cpm值(每分钟放射性强度)结果以细胞DNA中UdR释放率表示。2结果2．1沙棘汁对HL-60细胞和YAC-1细胞的DNA合成有抑制作用；附表说明沙棘汁不但对人的白血病细胞有抑制DNA合成的作用，而且对小鼠的白血病细胞DNA合成也有抑制作用。2．2沙棘汁对K562细胞DNA中UdR的释放作用；用��125�I-UdR标记的K562细胞，经0．37mg/ml、0．18mg/ml、0．09mg/ml的HRJ共

6、同培育后，UdR释放率似有随着HRJ剂量增加而增高的趋势。在0．18mg/ml和0．09mg/ml两剂量组释放率明显高于对照组(P<0．01)。UdR释放率对照组为(25．40±0．57)%，0．37mg/ml组为(32．39±2．53)%；0．18mg/ml组为(39．54±2．35)%；0．09mg/ml组为(37．73±4．73)%(各组n=6)。3讨论5近年，我国为开发利用沙棘，对沙棘的营养素含量及其生物学活性和对机体的作用进行了较广泛的研究[3-5]。据报道沙棘汁富含维生素C和E,沙棘中还含有大量的黄酮类物质，沙棘总黄酮具有可激活机体免疫功能等活性[4]。沙棘汁对致癌物N-二甲基

7、甲硝胺在大鼠体内合成及诱发癌症的发生起阻断作用，而这种效应与维生素C和E的含量是密切相关的。藤晓萍等也报道了沙棘籽油可抑制肿瘤生长并可激活机体免疫功能，沙棘籽油也富含维生素E。故认为沙棘汁具有能抑制肿瘤生长(抑制DNA合成)、提高机体免疫功能的作用，这种作用与沙棘汁富含多种营养素有直接关系。02本实验选择3种不同种类的白血病细胞，观察HRJ对白血病细胞的DNA解聚和DNA合成是否存在促进或抑制作用。从表1实验结果可知HR