噪声所致耳蜗毛细胞表达nf-κb中维生素e调节

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1、噪声所致耳蜗毛细胞表达NF-κB中维生素E调节【摘要】目的探讨维生素E在噪声暴露引起的大白鼠听力损伤有明显的保护作用及机制。方法健康雄性纯种Wistar大鼠9只，鼠龄2~3个月，体质量180~200g,由长春市高新开发区实验动物中心提供（清洁级）。无噪声暴露及耳毒性药物使用史，耳廓反射正常，实验前清洁外耳道，显微镜下检查均无中耳炎。以听阈、耳蜗基底膜铺片及免疫荧光染色为指标，观察大白鼠在稳态噪声持续暴露之前30d至暴露后7d，灌维生素E及生理盐水，对大白鼠听觉脑干电位分析和耳蜗外毛细胞（OHC）丢失率分析及NF-κB在耳蜗毛细胞中表达定量分析。结

2、果维生素E在噪声暴露后大白鼠听力阈值明显低于单纯噪声组，OHC丢失率也明显降低，免疫荧光染色结果显示VE干预组的耳蜗细胞表达NF-κB的强度低于单纯噪声组（P0．05），均有非常显著的差异（P<0．05）,表1-1为两组动物在噪音暴露后阈值的恢复曲线示意图,可见噪声暴露后1h差异不显著，外补VE组ABR阈值恢复明显高于单纯暴露组。见表1，图1。�2．2耳蜗基底膜铺片毛细胞变化9耳蜗基底膜铺片苏木素胞核染色显色结果：正常组耳蜗HC形态正常，其3排OHC和内毛细胞（IHC）排列整齐，结构清晰，无缺失。补VE在噪声暴露第7天OHC有散在缺失，且以第三排

3、为主，单纯暴露组出现细胞境界模糊或消失，且在3排OHC中以第三排OHC损伤为重，缺失明显，第二排、第一排均有不同程度的缺失，IHC也有丢失。对耳蜗基底膜铺片进行全长OHC记数，绘制耳蜗图，观察其OHC损失分布情况，补VE组OHC缺失率明显底于单纯暴露组（P<0．05）。见图2-1、2-2。�2．3耳蜗毛细胞NF-κB的表达单纯噪声组以及VE干预组在暴露后7d处死动物，分离耳蜗基底膜，进行NF-κB表达定量分析。结果见表3-1，图3-2。VE干预组的耳蜗毛细胞表达NF-κB的强度低于单纯噪声组。�3讨论�噪音对听觉的损伤是一个复杂的多因素的机制，各

4、种因素又相互关联，相互影响。目前倾向于将噪声对听觉的损伤归纳为机械性、血管性和代谢性三个方面。超高强度130dBNHL以上的噪声对HC的损伤主要以机械损伤为主，中高强度110-130dB9NHL噪声暴露以血管性和代谢性损伤为主。已经证实，强噪声刺激作用下耳蜗血管可发生一系列改变：血管痉挛收缩或扩张，血流速度变慢，局部血液灌注量减少；内皮细胞肿胀、通透性增加，血液浓缩粘滞度显著增高，血小板和红细胞聚集、血栓形成[1-5]；这些变化导致微循环障碍，耳蜗血流下降,内耳供血不足,内外淋巴液氧张力下降[6，7]。血管改变引起的局部缺血缺氧，造成了耳蜗内环境

5、的代谢紊乱，HC代谢障碍，酶系统的功能障碍，从而细胞出现包括Corti器形态结构的损伤和声电转换的功能障碍等一系列病理生理改变。最近研究表明[8]，噪声引起代谢性损伤首先对两个结构产生破坏，一是可影响静纤毛结构，从而造成耳蜗微机械结构的改变，二是使IHC过量释放神经介质，从而影响神经传导。有研究表明，噪声暴露可破坏耳蜗的抗氧化体系，导致氧化和抗氧化失衡，从而在耳蜗产生大量活性氧自由基。过量的氧自由基可以攻击生物膜，使膜发生脂质过氧化（LPO），诱发LPO的大量产生，影响细胞内的重要生化反应，对耳蜗组织产生损伤。VE通过自身被氧化成生育醌，从而将R

6、OO-转变为化学性质不活泼的ROOH，中断脂类过氧化的连锁反应，有效抑制脂类过氧化作用，保护细胞免受不饱和脂肪酸氧化产生的毒性物质的伤害，在防止衰老，抗肿瘤等方面起着重要的作用。VE本身具有产生酚氧基的结构，产生的酚氧基能够猝灭并能同单线态氧反应，保护不饱和脂肪酸免受单线态氧损伤。还可以被阴离子自由基和羟自由基氧化，使不饱和脂肪酸免受自由基攻击，从而抑制脂肪酸的自动氧化。VE不仅对生物膜的结构和功能有较好的保护作用[9]，还能迅速捕捉自由基，生成的生育酚自由基又可进一步与另一个分子自由基反应生成非自由基生育醌，故抗氧化能力较强[10]。�9NF-

7、κB是一类具有多向转录调节作用的核蛋白因子，存在于多种组织的多种细胞中，具有广泛的生物学活性激活后参与许多基因的转录调控，在感染、炎症反应、氧化应激、细胞增生等过程中发挥作用。近年的研究表明NF-κB与细胞凋亡的关系密切，其参与多种凋亡相关基因的转录调控在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。多种细胞外刺激信号可激活NF-Κb，如细胞因子IL-1TNF-a及活性氧自由基等[11，12]席恺等[13]采用豚鼠耳蜗缺血-再灌注损伤模型，观察耳蜗组织形态功能变化与NF-κB、TNF-α表达的关系。结果发现，缺血组及缺血再灌注各组的NF-κB在耳蜗各转SV，

8、IHC，OHC和SGC各部位表达随时间延长逐渐增强，再灌注24h组达高峰。而TNF-a表达水平与NF-κB表达一致。认为耳蜗缺血过程中大