动物生物化学实验讲义

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1、实验讲义（霍金龙老师）实验一实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验四血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法）实验五核酸的定量测定（紫外吸收法）实验六全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法）实验七PCR扩增基因实验八琼脂糖凝胶电泳实验九凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素实验十生物化学实验技术理论讲授核酸蛋白层析分离系统实验工作流程一，准备工作1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪）1台2，色谱采集器1套3，自动部分收集器1台4，恒流泵1台5,层析柱1支6，溶液容器和试剂样品二

2、，开机调试1，核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。2，设定自动部分收集器收集样品的所需时间。3，设定恒流泵的所需流量。三，进行实验前的洗脱工作等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。四，数据采集及计算分析把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。以上为一个完整的实验操作过

3、程实验一实验基本知识与操作一.目的1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。2.掌握各种仪器的正规操作。3.清点洗刷实验用具。二．实验内容（一）常用生化仪器量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器玻璃仪器容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等（二）玻璃仪器的洗涤1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。2、使用过的玻璃仪器洗涤（1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，

4、再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。（2）量器，如吸管、滴定管、容量瓶等先用自来水冲洗，直至不挂水珠，再用蒸馏水冲洗1－2次，风干备用。若冲洗后仍挂水珠，则将其晾干后浸于铬酸洗液浸泡数小时。然后用自来水反复冲洗干净，再用蒸馏水冲洗1－2次，除吸管可烘干外，其它只能倒置晾干。3、操作：每个人按上述方法刷洗5支试管及烧杯、锥形瓶各1-2个。洗净后请教师检查。（三）吸量管和微量移液器的使用1.吸量管的使用（注意标签、选择容量大小合适的吸量管）（1）正确拿法中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端（2

5、）取液用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。（3）调刻度吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。（4）放液吸量管移入准备接受溶液的容器中，仍使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。奥氏吸量管和刻度到底的吸量管应吹出尖端残留的液体。移液管应最后靠壁15秒。2.微量移液器的使用调节体积选取钮至所需值，套上吸头，旋紧。垂直持握移液器，用大拇指按下液体吸放钮至第1档，将吸头插入待吸溶液，松开大拇指使吸放钮回复原位。

6、将移液器移入准备接受液体的仪器，用大拇指再次按下液体吸放钮，至第1档后继续至第2档以排空液体。3.练习吸量管的使用取50ml锥形瓶加入未知酸5ml,酚酞指示剂1滴，摇匀，用0.01mol/LNaOH滴定，记录结果。（无色酚酞遇酸不变色，遇碱变红。）滴定时边滴边摇动锥形瓶。(四)试剂配制：1、溶液浓度表示法（1）重量浓度：有时候溶液的浓度以单位体积溶液中所含溶质的重量来表示。现在规定容量的单位是升（L），所以浓度表示为克/升（g/L）、毫克/升（mg/L）、微克/升（g/L）等。（2）百分浓度：过去习惯用百分含量来表示浓度，但其含意很不清楚，如2％的醋酸可

7、以解释为：每100g溶液中有2g醋酸（W/W），每100ml溶液中有2g醋酸（W/V〕，每100ml溶液中有2ml醋酸（V/V）。（3）摩尔（mol）和摩尔浓度（mol/L）：摩尔浓度是用以表明在每升溶液中所含溶质的摩尔数。1摩尔浓度的溶液为每升溶液中含溶质1摩尔（mol/L）。2、溶液的配制方法（1）百分浓度的配法： a.重量与体积百分浓度（W/V）：即每100ml溶液中含有溶质的克数。如欲配制5%（W/V）NaCl溶液，则称取5gNaCl用少量蒸馏水溶解后，再加水到100ml即可。b.体积与体积百分浓度（V/V）：即每100ml溶液中含有溶质的毫升数。

8、如欲配制30%（V/V）的醋酸溶液，即用量简量取30ml冰醋酸（含