婴儿谷物类辅助食品中黄麴毒素b1之检验方法（草案）

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1、103年12月11日部授食字第1031901845號預告訂定嬰兒穀物類輔助食品中黃麴毒素B1之檢驗方法(草案)MethodofTestforAflatoxinB1inCereal-basedFoodsforInfants1.適用範圍：本檢驗方法適用於嬰兒穀物類輔助食品中黃麴毒素B1之檢驗。2.檢驗方法：檢體經萃取及淨化後，以高效液相層析儀(highperformanceliquidchromatograph,HPLC)分析之方法。2.1.裝置：2.1.1.高效液相層析儀：2.1.1.1.檢出器：螢光檢出器(

2、Fluorescencedetector)。2.1.1.2.層析管：Cosmosil5C18-AR，5µm，內徑4.6mm×25cm，或同級品。2.1.1.3.光化學反應器：KnittedReactorCoils(KRC)25-25，或同級品。2.1.2.均質機(Homogenizer)：可達15000rpm以上並適用有機溶劑者。2.1.3.粉碎機(Grinder)。2.1.4.氮氣蒸發裝置(Nitrogenevaporator)。2.2.試藥：氯化鈉採用試藥特級；甲醇採用液相層析級；去離子水(比電阻於25

3、℃可達18MΩ．cm以上)；黃麴毒素B1對照用標準品。2.3.器具及材料：2.3.1.離心管：50mL，PP材質。2.3.2.容量瓶：1mL及10mL，褐色。2.3.3.濾膜：孔徑0.22μm，Nylon材質。2.3.4.濾紙：WhatmanNo.1，直徑11cm，或同級品。2.3.5.玻璃纖維濾紙(Glassmicrofibrefilters)：直徑9cm。2.3.6.塑膠針筒：1mL及10mL。2.3.7.免疫親和性管柱(Immunoaffinitycolumn)：採用內含對黃麴毒素B1、B2、G1及G

4、2具專一性單株抗體之AflaTest-P管柱，或同級品。2.3.8.針筒過濾器(Syringefilter)：濾膜孔徑0.22μm，PTFE材質。2.4.試劑之調製：2.4.1.50%甲醇溶液取甲醇與去離子水以50：50(v/v)之比例混勻。2.4.2.80%甲醇溶液取甲醇與去離子水以80：20(v/v)之比例混勻。1103年12月11日部授食字第1031901845號預告訂定2.5.移動相溶液之調製：取甲醇與去離子水以45：55(v/v)之比例混勻後，經濾膜過濾，取濾液供作移動相溶液。2.6.標準溶液之配

5、製：精確量取黃麴毒素B1對照用標準品約1mg，精確稱定，以甲醇稀釋並定容至10mL，作為標準原液。臨用時取適量標準原液，以50%甲醇溶液稀釋至0.05～25ng/mL，供作標準溶液。2.7.檢液之調製：將檢體磨碎混勻後，取約25g，精確稱定，置於均質機中，加入氯化鈉5g及80%甲醇溶液125mL，以15000rpm均質2分鐘，經濾紙過濾。精確量取濾液10mL，加去離子水40mL混勻，以玻璃纖維濾紙過濾。精確量取濾液25mL，注入免疫親和管柱(流速控制1滴/秒)，待濾液完全通過管柱後，以去離子水10mL流洗2

6、次(流速控制1滴/秒)，棄流出液，再以甲醇1mL沖提(流速控制1滴/秒)，收集沖提液，於40℃水浴中以氮氣濃縮至乾，再以50%甲醇溶液定容至1mL，經針筒過濾器過濾，供作檢液。2.8.鑑別試驗及含量測定：精確量取檢液及標準溶液各50μL，分別注入高效液相層析儀中，依下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間比較鑑別之，並依下列計算式求出檢體中黃麴毒素B1之含量(ppb)：CVF檢體中黃麴毒素B1含量(ppb)=MC：由標準曲線求得檢液中黃麴毒素B1之濃度(ng/mL)V：檢體最後定容之體積

7、(mL)F：稀釋倍數(25)M：取樣分析檢體之重量(g)高效液相層析測定條件：層析管柱：Cosmosil5C18-AR，5µm，內徑4.6mm×25cm。光化學反應器：KRC25-25。螢光檢出器：激發波長360nm，發射波長440nm。移動相溶液：依2.5.節所調製之溶液。移動相流速：1.0mL/min。附註：1.本檢驗方法之定量極限為0.05ppb。2103年12月11日部授食字第1031901845號預告訂定2.檢體中有影響檢驗結果之物質時，應自行探討。3.以液相層析串聯質譜儀(LC/MS/MS)進行

8、確認時，其LC/MS/MS之多重反應偵測(multiplereactionmonitoring,MRM)模式參考參數如下表離子對去集簇碰撞離子化分析物前驅離子(m/z)＞電壓能量模式(V)(eV)產物離子(m/z)+313＞241*4836黃麴毒素B1ESI313＞2854822*定量離子對註：上述參數不適時，依所使用之儀器，設定適合之參數。參考文獻：AOAC.2004.AflatoxinB1inbabyfood