黄芩总黄酮的提纯和大孔吸附树脂分离纯化

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1、综合实验报告课题黄芩总黄酮的提取和大孔吸附树脂分离纯化姓名xxx指导老师xxx专业制药工程班级xxxx班学号xxxxxxxxx日期2014.12.07一、目的要求1、了解大孔吸附树脂的性能和分离纯化原理；2、学习用大孔吸附树脂分离纯化中药有效成分的工艺过程及工艺参数优化方法。二、实验原理黄芩是中国药典收录的传统中药，现代药理研究证明黄芩具有的抗氧化、抗炎、抗病毒、抗肿瘤及改善心血管功能等作用，与其含有的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等黄酮类成分密切相关。大孔吸附树脂是一种不含交换基团的具有大孔立体网状结构的高分子吸附剂，具有较大的比

2、表面积，主要按极性强弱分为极性、弱极性和非极性三种类型，可以有效吸附具有不同化学性质的各种类型化合物，具有理化性质稳定，吸附容量大，吸附速度快，选择性好，再生处理简单，机械强度高等优点。大孔吸附树脂近年来在药学领域中应用日益广泛，成为分离中药有效成分的一种有效方法。中药提取分离是中成药生产过程中最关键的环节，也是目前制约提高中药质量的关键问题，水提醇沉除杂等老的中药提取工艺及设备基本沿用至今，没有明显的改革和突破，致使我国的中药制药技术滞后于国际制药工业水平。与传统的除杂方法方法和工艺相比，采用大孔吸附树脂技术有以下3个主要优

3、点：（1）经大孔吸附树脂纯化后，有效成分高度浓缩，杂质大大减少，能缩小剂量，提高中药内在质量和制剂水平。（2）能有效除去水提液中大量的糖类、无机盐、黏液质等吸湿成分，减少产品的吸湿性，增强产品的稳定性，有利于多种中药剂型的生产。（3）设备简单，免去了静置沉淀、浓缩等耗时的工序，缩短生产周期，降低成本。5本实验采用水煎煮法提取黄芩总黄酮，用AB-8大孔吸附树脂（弱极性）进行分离纯化，对分离纯化工艺进行研究，制备黄芩总黄酮。三、实验器材1、仪器与设备回流冷凝装置（包括500mL圆底烧瓶，冷凝管，加热设备、铁架台），控温水浴埚，75

4、6紫外可见分光光度计，玻璃层析柱（有活塞有砂芯），20mm×500mm，20mL具塞刻度试管及试管架，1000mL烧杯，250mL烧杯，250mL量筒。2、试剂和药品黄芩药材（粉碎粒度为10目）500g，黄芩苷对照品，95%乙醇，AB-8大孔吸附树脂。四、实验步骤1、黄芩总黄酮的提取：称取10g黄芩饮片，加10倍量水，预先浸泡30分钟（呈浅黄色），煎煮1.0h，煎煮2次，合并煎煮液，备用（呈红褐色）。取样适当稀释（约2000倍），测定总黄酮含量。2、AB-8大孔吸附树脂分离纯化：在所确定的样品液上柱体积和洗脱液体积条件下，用大

5、柱子将所有的样品溶液进行分离纯化。收集流出液，60℃减压浓缩至稀浸膏，真空干燥得黄芩总黄酮。精密称取样品粉末适量，测定总黄酮含量，与《中国药典》黄芩提取物进行比较。3、线性关系考察：精密称取黄芩苷对照品2.38mg，用70%乙醇超声至完全溶解，定容至10mL，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL于10mL量瓶中，再用70%乙醇定容至刻度，以70%乙醇为空白，于278nm处测定吸光度(A)。以质量浓度(C，μg/ml)为横坐标，吸光度A为纵坐标，计算回归方程。4、样品含量测定：取样品

6、液根据情况适当稀释，或精密称取样品粉末适量，用70%乙醇溶解，定容于25ml量瓶，于278nm处测定吸光度值，利用回归方程计算含量。五、数据处理1、实验数据记录实验共称取了10.06g黄芩饮片。在黄芩总黄酮的提取实验中，将最后得到的样品通过70%乙醇稀释2000倍，以70%的乙醇为对照品测定吸光度，于278nm处测定吸光度记录如下表1。5在样品含量测定实验中，将浸膏用70%的乙醇超声溶解并定容至250mL，再取0.04mL用70%的乙醇定容至20mL，以70%乙醇作为对照品测定吸光度，于278nm处测定吸光度记录如下表1。表1

7、黄酮含量测定的相关数据实验步骤波长λ/nm吸光度A总黄酮提取277.000.294样品测定277.600.132精密称取标准品3.4mg，于278nm处测定吸光度记录如下表2。表2标准曲线的相关数据对照品体积/mL质量浓度/μg/mL波长λ/nm吸光度A0.13.4278.000.1690.26.8277.800.3370.310.2277.800.4880.413.6277.800.6990.517.0277.600.8562、数据处理通过以上表格数据绘制质量浓度与吸光度的线性回归方程如下：得到线性回归方程为y=0.0511

8、x－0.0110，代入y=0.294，得到x=5.97，即黄芩总黄酮粗品质量浓度为11.94g/mL。代入y=0.132，得到x=2.80则在精制后的黄芩总黄酮的含量=2.80×20×250/0.04=350000μg=0.35g。5五、实验结果分析由以上数据处理可知，黄芩总