中华鳖（pelodiscussinensis）摩氏摩根菌

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1、第44卷第3期海洋与湖沼Vol.44,No.32013年5月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICAMay,2013中华鳖(Pelodiscussinensis)摩氏摩根菌*(Morganellamorganii)的鉴定及致病性研究1,22222①孔蕾朱凝瑜贝亦江丁雪燕陈健舜(1.浙江大学动物预防医学研究所杭州310058;2.浙江省水产技术推广总站杭州310012)提要从3只患有头面部疖疮中华鳖(Pelodiscussinensis)的肝脏、肾脏、头面部病灶干酪样组织,分离得到12株细菌。综合菌落形态观察、16SrRNA序列分析与生

2、化特性分析方法,所有分离株均为摩氏摩根菌(Morganellamorganii)。稚鳖和小鼠感染试验提示该菌具有较强的致病力,其对小鼠的7.24半数致死量(LD50)为10。同时采用常规琼脂扩散(K-B)法进行8类14种常用药物的抗菌敏感性测定,结果表明,分离株对氨基糖苷类、β-内酰胺类、四环素类、林可酰胺类、多肽类、喹诺酮类、磺胺类等中的8种药物耐药,对氨曲南、氟苯尼考、头孢哌酮则较为敏感。本研究为中华鳖以头面部疖疮为主要临床特征的摩氏摩根菌病的首例报道,旨在为该病的确诊与防治提供科学依据和参考。关键词中华鳖;摩氏摩根菌;鉴定;致病力;耐药性中图分类

3、号S912中华鳖(Pelodiscussinensis)在浙江省各地广泛养2012年7月,浙江省某规模化中华鳖养殖场暴发殖,在全省水产养殖业中占有非常重要的地位,已形流行性疾病。发病鳖于2011年9月起饲养于温室,成从原良种场建设、苗种繁育、养殖生产、饲料研发2012年6月12日移养至外塘,规格为350—650g/只,到产品加工出口的产业链。2012年7月初开始发病。从发病鳖体内分离到12株虽然中华鳖养殖产业蓬勃发展,然而随着养殖优势菌,中华鳖与小鼠感染试验证实该菌具有较强规模的扩大,以及集约化程度的提高,病害频繁发生,的毒力;采用16SrRNA序列分

4、析、Vitek生化鉴定等对产业发展造成了严重影响。细菌性病原是引起中华方法,对该菌进行了种别鉴定;同时通过药敏试验对鳖疾病最常见的病原,造成的经济损失也最大。中华该致病菌进行敏感药物筛选,以期为该病的确诊与鳖细菌性病原种类繁多,目前已经报道的主要有嗜防治提供科学依据和参考。水气单胞菌(Aeromonashydrophila)(陆宏达等,1996;1材料与方法吴惠仙,2004)、温和气单胞菌(Aeromonassobria)(马有智等,2000b;吴惠仙,2004)、豚鼠气单胞菌1.1细菌分离(Aeromonascaviae)(余旭平等,1997;吴惠仙

5、,2004)、3只中华鳖于发病高峰期采自浙江萧山某规模化迟缓爱德华菌(Edwardsiellatarda)(蔡完其等,1997;养殖场,编号分别为t28、t29、t30,均具有典型的临潘晓艺等,2010),此外还有弗氏柠檬酸杆菌床症状。其主要症状为头面部出现畸形,病灶向外明(Citrobacterfreundii)(林启存等,2008;胡广洲等,显突出,类似疖疮样(图1a);剖开病灶可见干酪样组2010)、格氏乳球菌(Lactococcusgarvieae)(陈泽祥等,织(图1b),并有一股腥恶奇臭味;但未发现内脏器官2008;胡广洲等,2010)等的

6、报道。有明显病变。无菌剖取肝脏、肾脏与头面部病灶内的*浙江省重大科技专项,2012C12907-1号;浙江省水产技术推广总站站长基金资助项目,TGZ201101号。孔蕾,工程师,E-mail:xmxz@163.com①通讯作者:陈健舜,副研究员,E-mail:allan_523@163.com收稿日期:2012-11-17,收修改稿日期:2013-02-253期孔蕾等:中华鳖(Pelodiscussinensis)摩氏摩根菌(Morganellamorganii)的鉴定及致病性研究723干酪样组织,在脑心浸液(BHI)平板培养基上划线分(1987)的方

7、法使用MEGA4.0软件,采用邻接法离。37℃培养24h后,挑取优势生长的单菌落进行纯(Neighbor-joiningmethod)构建系统发育树,并通过化培养。1000次的自举分析(boostrap)进行置信度检测。1.4动物感染试验1.4.1中华鳖感染试验随机挑选头面部分离株t28-h-m1,接种于BHI培养基,37℃培养16—18h,用8无菌BHI培养基稀释成10CFU/mL的细菌悬液备用。取6日龄、4—6g/只的稚鳖进行腹腔注射,每组15只,剂量为0.1mL/只。对照组中华鳖注射等体积的无菌生理盐水,数量同试验组。连续观察7d,记录其发病及死

8、亡情况;同时对濒死中华鳖的肝、肾进行细菌分离和鉴定,观察再分离菌株与原菌株的形态和生化特性是否