光谱核型分析技术在白血病中的应用

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1、光谱核型分析技术在白血病中的应用【摘要】 光谱核型分析技术是近几年建立的一种细胞遗传学检测方法，它可以在没有任何预知的情况下同时对人的黠24条染色体进行核型分析消，可以识别常规显带和单纯圆应用荧光原位杂交难以精确桡辨认的一些畸变，具有高度睦的精确性、敏感性、直观性芤。本文综述了光谱核型技术殄的原理及其在白血病中的应ё用。【关键词】 光谱核迕型分析ApplicationofSpectra乎lKaryotyping谄inLeukemia——雾ReviewAbstr酏actSpectralk怄ar

2、yotyping(S禚KY)isanovelcytogeneticte斤chnique，hasb溥eendevelopedtounambiguouslydisplayan缩didentifyall⒙24humanchrom鼯osomesatonet胍imewithoutap跗rioriknowled颗geofanyabnor硒malitiesinvo晌lved.SKY discernstheaber狐rationsthatc╁annot bedetectedverywell虱bycon

3、vention坑albandingtec虮hniqueandflu谓orescentinsituhybridizat授ion(FISH).So死SKYishyper-a⑤ccurate，hypersensitive，a害ndhyper-intu欷itional.Inth债ispaper theb隈asicprincipl寇eofSKYtechni葺que anditsap佶plication in承leukemiacyto灯geneticswere岘reviewed.Ke纲ywordsspe

4、ctr圪alkaryotypin杞g;chromosome14/14苷;karyotype;l涣eukemia自引入染茁色体显带技术以来，在白血鸪病及其它恶性血液病中发现恰了大量的重复性畸变，从而扛使染色体核型检测不仅成为井白血病确诊和分型的重要依爿据，而且作为独立的预后因霾素之一，对诱导缓解和复发篆的判断提供了有价值的参考。1997年，WHO已明ⅱ确将一些染色体异常列为急垌性白血病的特殊亚型。随着细胞遗传学技术的不断发展捻，人类对染色体核型的检测佟水平日益提高。在荧光原位杂交基础上，光谱

5、核型分析埃技术、多色FISH、彩色显带FISH等技术将染色卉体分析带入彩色世界。19で96年，Schrock等胙［1］首次报道了SKY技熟术。这一技术克服了传统FеISH只能检测已知位点的檠异常的缺点，可以在没有任钱何预知的情况下将人类及小馨鼠的全部染色体以不同颜色疏显示出来，因而它可用于染噗色体的全面筛查，将白血病璋的细胞遗传学研究引向深入衲。SKY技术的基本原理SKY技术联合应用了光谱护干涉仪、频谱遥感连接电荷醢耦合器件和傅立叶变换(f怔ouriertransf筵ormation)，在可ワ

6、见光和近红外范围去测量所é有点的散射光谱，使得多光驵谱重叠探针得以应用，其成鸦像及分析过程分为三部分。杂交反应 14/14SKY技术瓞是将人类的24条染色体的涂染探针用5种不同的荧光木素或其组合进行不同标记，仞然后将探针与中期分裂相进削行原位杂交，其中SKY应厚用的涂染探针是流式细胞分鼍选技术分拣出染色体，再经瞎退化低聚寡核苷酸引物PC┡R扩增获得的。图像获取杂交后的标本通过荧光显微镜获得荧光图像并进行光谱成像，其具体过程为由特制傧光源和滤镜激发所有荧光染躏料，通过光谱干涉仪，给特犄定的光

7、谱分配红、绿、蓝3蜍种显示色，又由CCD获取航每一个像素的干涉图像，形瞅成一个三维数据库，并得到殆每个像素的光程差与强度间β的对应曲线。由于各条染色体所带有的单个荧光染料不脯同或组合不同，此曲线经傅⒄立叶变换，再由计算机转换哐后会获得不同的区分色，这所样再分配到每条染色体上，使得24条染色体可以不同泽颜色区分。图像分析 经专门的SKY软件分析获肭得图像。SKY与M-FISH的比较1996年毂，Spicher等［2］高报道了另一种以不同颜色描希绘人类全部染色体的技术，成为M-FISH。尽管

8、S淹14/14KY和M-FISH都是在痞FISH的技术基础上发展璧的，但这两种技术在原理上盈是截然不同的。SKY技术是建立在离散光谱测量的基戗础之上的，其优点是可以立ォ即并全面鉴定出染色体内的┪异常，如复杂的重组，易位︳等，并以不同颜色显示变化╆后的派生染色体。检测染色体内部重组时，SKY的精瘊确性为500-1500k镭b［3］，当然这也取决于镦杂交的优劣及分裂相的伸展恿情况［1，4，5］。S陛KY测量的是光谱，因而可攥以增强多色荧光团的识别力掖，用光谱核型全面分析获得能信息。M-FISH的