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1、病理学论文：胃印戒细胞癌的细胞起源及其癌前病变的病理学摘要目的:研究胃印戒细胞癌的发生与胃腺增殖区的关系,探讨其细胞起源和癌前病变.方法:以42例早期胃印戒细胞癌为研究对象,观测其组织形态,采用免疫组织化学双染标记癌灶内分化标志物MUC5AC和MUC6的表达情况,检测癌灶不同区域Ki-67以及胃肠道干/祖细胞标志物musashi-1的表达差异,并与癌旁胃腺进行对比.结果:早期胃印戒细胞癌具有特征性的分层结构.该结构分为两层,浅表层为典型的印戒细胞,体积大,胞质丰富,基底层为原始的癌细胞,体积小,核/浆比大;在形态和解剖定位上,基底层癌细胞与癌旁胃腺增殖区细胞类似,免疫组织化
2、学显示其MUC5AC、MUC6表达均为阴性,或仅微弱表达MUC5AC,而Ki-67、musashi-1表达率显著高于浅表层印戒细胞(t=31.0和22.8,P<0.01);基底层癌细胞可向浅表层印戒细胞分化过渡,这与增殖区细胞向胃小凹上皮分化的过程相似;癌旁可见胃腺增殖区细胞异型增生,其表型与分层结构基底层癌细胞一致.结论:胃印戒细胞癌可能起源于增殖区MUC5AC-/lowMUC6-的胃小凹前体细胞,同时增殖区的异型增生是此类胃癌的癌前病变.关键词:胃肿瘤;印戒细胞癌;肿瘤发生;免疫组织化学0引言基于临床病理特征的不同,胃癌可分为肠型和弥漫型两类[1].近年的流行病学调查显
3、示,胃癌的总体发病率已明显下降[2],但弥漫型胃癌尤其是印戒细胞癌的发病率却显著升高[3],因此这类胃癌也受到越来越多的关注.迄今,胃印戒细胞癌的早期诊断率不高,一个重要原因是对此类胃癌的病理形成机制和癌前病变尚不清楚.胃印戒细胞癌与肠型胃癌相似,起源于胃黏膜上皮.组织学上,胃黏膜的基本结构单位是胃单元(gastricunits),该结构为单克隆起源[4],由胃小凹和胃腺组成,其中胃腺又依次分为峡部、腺颈和基底部.胃腺的峡部以及腺颈上部的细胞增殖活跃,被称为增殖区.研究证实,增殖区是胃印戒细胞癌起源的部位[5].然而,这一区域实际上含有多种低分化细胞,并具有不同分化方向[6
4、,7],印戒细胞癌究竟起源于增殖区的何种细胞,目前尚不清楚.为探讨这一问题,本研究以早期胃印戒细胞癌为观测模型,采用免疫组织化学双染的方法,观测了早期肿瘤细胞的空间分布、分化表型和增殖特性,希望为认识此类肿瘤的细胞起源及其癌前病变提供新的病理学依据.1材料和方法1.1材料回顾我院1988-2008年以及无锡市第三人民医院2007-2008年手术切除的胃癌根治标本约2200例,根据最新WHO国际肿瘤病理分类对胃印戒细胞癌的病理诊断标准(印戒细胞占癌细胞总数的50%以上),以及早期胃癌的诊断标准(癌细胞浸润深度不超过黏膜下层),共确认42例早期印戒细胞癌标本作为研究对象,患者年
5、龄30-77岁,其中男25例,女17例,均无家族史;肿瘤分期:24例为T1a期,局限于黏膜内;18例为T1b期,累及黏膜下层.对所有标本的存档蜡块连续切片(厚3μm),苏木精-伊红(HE)染色.另取10例正常胃黏膜作为对照.1.2方法1.2.1免疫组织化学染色:采用免疫组织化学双染标记MUC5AC和MUC6阳性细胞,其中MUC5AC主要表达于胃小凹、峡部和腺颈部的黏液细胞[8](抗体购自福州迈新公司,为工作液),MUC6则局限于腺颈的黏液细胞和基底部的幽门腺上皮[8](浓缩抗体购自上海长岛公司,稀释度1∶50),此二者常被用来作为胃上皮分化的标志物.操作按产品说明书进行,并
6、根据文献略有改变[9],步骤简述如下:石蜡切片脱蜡至水;柠檬酸缓冲液(pH6.0)95℃修复10min,保温10min;3%H2O2室温孵育后血清封闭10min;而后采用SP法先标记MUC6,显色系统为BCIP/NBT,阳性呈蓝黑色,定位于细胞质;随后再次进行抗原修复,目的为暴露MUC5AC抗原,同时灭活前一次染色时残留抗体的免疫活性,抗原修复方法同前.采用SP法标记MUC5AC,显色系统为HRP/AEC,阳性部位呈红色,定位于细胞质.另取连续切片单独标记Ki-67(抗体购自福州迈新公司,为工作液)和musashi-1(SantaCruz公司,浓缩液,稀释度1∶100),其
7、中musashi-1为一类RNA结合蛋白,与干细胞的不对称分裂有关[10],是神经干细胞和胃肠道干/祖细胞的标志物[11-13].染色仍采用SP法,显色系统为HRP/DAB,阳性部位呈棕黄色,定位于细胞核.阴性对照采用PBS替代一抗与切片孵育,其余操作相同.1.2.2不同区域印戒细胞平均Ki-67、musashi-1阳性细胞比例的测定及比较:免疫组织化学染色标记Ki-67、musashi-1后,检测不同区域阳性癌细胞的比率.每例标本测定两个区域:癌灶靠近黏膜表面上皮的浅表部分和浸润最深的部位.每个区域随机选取5个视
