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《糖尿病临床论文：还原型谷胱甘肽对糖尿病大鼠视网膜病变干预研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、糖尿病临床论文：还原型谷胱甘肽对糖尿病大鼠视网膜病变干预研究【摘要】目的探讨糖尿病视网膜病变与诱导型一氧化氮合酶的表达的关系并探讨还原型谷胱甘肽对诱导型一氧化氮合酶表达的影响以及对糖尿病视网膜病变的防治作用。方法雄性SD大鼠70只随机分成对照组10只,糖尿病1、3、6月组以及还原型谷胱甘肽干预3、6月组各12只。分别留取视网膜标本,部分标本观测视网膜病理改变;部分标本采用免疫组化法测定诱导型一氧化氮合酶表达。结果视网膜病理结果显示:与正常对照组相比,糖尿病1、3、6月组视网膜病理改变逐步加重;免疫组
2、化分析结果显示诱导型一氧化氮合酶表达在糖尿病各组均明显增强(P<0.05),干预组较糖尿病各组均有明显改善(P<0.05)。结论糖尿病视网膜病变早期就出现视网膜诱导型一氧化氮合酶表达增强,且随着视网膜组织病理学改变而持续活化。还原型谷胱甘肽有效抑制了诱导型一氧化氮合酶表达,从而达到视网膜保护的目的。 【关键词】 还原型谷胱甘肽;视网膜;糖尿病;诱导型一氧化氮合酶糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见和最严重的并发症之一,其已成为大多数发达国家工作年龄人群致盲的首要原因[1]。 一氧化氮(NO)能调节许
3、多重要的生理过程,包括神经传递、血管舒张等,是视网膜血管功能的重要调节因子,在糖尿病视网膜病变患者及动物模型中都发现一氧化氮水平升高。一氧化氮合酶催还L精氨酸生成一氧化氮,而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生过多的一氧化氮已经被证明在包括糖尿病视网膜病变在内的许多眼科疾病中发挥重要作用。 本实验旨在探讨糖尿病视网膜病变与iNOS的表达的关系并探讨还原型谷胱甘肽对iNOS表达的影响以及对糖尿病视网膜病变的防治作用。 1材料和方法 1.1糖尿病动物模型的建立及分组实验动物为生后6周、体重18
4、0~200g的雄性SD大鼠70只,本院实验动物部提供。大鼠随机分成对照组10只,糖尿病组36只(1、3、6月各12只),干预组24只(3、6月各12只)。糖尿病组、干预组鼠按60mg/kg的剂量一次性腹腔内注射链脲佐菌素(STZ,美国Sigma公司),3d后使用血糖仪(强生公司稳豪型)测空腹血糖达16.6mmol/L以上,且尿量及饮水明显增多鼠为糖尿病大鼠模型。对照组仅腹腔内注射同样体积的0.1mmol/L的柠檬酸缓冲液。对于血糖过高或体重下降过快的大鼠每周接受4~5次,每次1~2u中效人胰岛素(优
5、泌林N)皮下注射,以防止酮症或体重下降过快[2]。干预组大鼠每天以100mg/kg的剂量腹腔注射还原型谷胱苷肽(商品名:阿拓莫兰,重庆药友制药公司)。实验结束时,去除中间死亡鼠和血糖恢复鼠进行实验统计。 1.2一般组织学处理观察期满后分批用水合氯醛过量麻醉处死大鼠,轻摘眼球,将右眼球固定于10%中性福尔马林中48h,经乙醇常规脱水,二甲苯透明后浸蜡包埋。连续4μm厚切片,用于HE染色;取左眼球迅速剥离视网膜放置于液氮中保存。 1.3诱导型一氧化氮合酶的表达免疫组织化学测定诱导型一氧化氮合酶表达
6、:取石蜡切片,常规脱蜡、水化,抗原修复,3%H2O2孵育,血清封闭,PBS冲洗,滴加1:100稀释的iNOS抗体,4℃放置过夜,PBS冲洗,滴加生物素化二抗,37℃孵育10min,PBS冲洗;滴加辣根过氧化物酶标记的链卵白素,37℃孵育15min;DAB显色,苏木素复染,中性树脂封片。应用HPIAS•1000型高清晰度彩色病理图像分析系统,进行免疫组化图像分析:经标准灰度校正后,每张切片随机取5个视野,测定阳性染色物质的平均吸光度值,以每组的平均吸光度值进行比较。1.4统计分析数据以均数±标准差(
7、x±s)表示。数据处理采用SPSS统计软件(11.0版)在计算机上进行。所有数据采用方差分析及t检验,P<0.05为有显著性差异。 2结果 2.1大鼠的一般情况(表1)各观察终点去除中间死亡鼠和血糖恢复鼠,进行实验统计。糖尿病组大鼠血糖持续>16.5mmol/l,与对照组相比体重增加明显减低,而干预组大鼠血糖及体重与糖尿病组无明显差别(见表1)。 表1 注:*与当月对照组相比有显著差异(P<0.05);☆与当月糖尿病组相比无显著差异(P>0.05) 2.2视网膜病理改变1月
8、组与对照组比较形态无明显改变;糖尿病3月组鼠视网膜节细胞层及内核层水肿,尤其是在静脉血管周围细胞排列紊乱,管径不规则,呈节段性膨大,可见到闭塞的无细胞毛细血管,但未见血管瘤、细胞栓塞、出血。糖尿病6月组视网膜水肿较3个月重,尤其内核层细胞排列紊乱,内核层血管周围水肿更明显,节细胞数量减少,可见毛细血管管径粗细不均重于3个月组,闭塞的毛细血管既无内皮细胞也无周细胞,管腔闭锁,管径粗细不等,管壁边缘不规则,其周围可见扩张。干预组与当月糖尿病组比较病理改变减轻。 2.3
