欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:11854643
大小:738.00 KB
页数:13页
时间:2018-07-14
《沉默信息调节因子1(sirt1)基因沉默诱导肝癌细胞老化及机制研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、沉默信息调节因子1(SIRT1)基因沉默诱导肝癌细胞老化及机制研究自然科学基金项目:81171628作者简介:宋春丽,女,28岁,硕士,初级检验师,分子生物学,联系电话:15223340763,Email:498421489@qq.com通讯作者:陈娟,联系电话:13883874026.Email:yixin_xinyuan@163.com宋春丽1,任吉华1,张祯祯2,陶颖1,陈娟11.重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆市4000162.重庆医科大学附属儿童医院感染科重庆市400014[摘
2、要]目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子1(SIRT1)基因沉默对肝癌细胞老化的影响及机制研究。方法通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT1的表达,并通过Real-timePCR和Westernblot验证SIRT1基因的沉默效果。Brdu标记台盼蓝排斥实验检测细胞增殖生长情况,流式细胞术检测细胞周期变化;β-半乳糖苷酶染色观察肝癌细胞有无老化;Westernblot检测衰老相关基因p53和p21蛋白的变化。结果慢病毒介导的shRNA能显著抑制细胞SIRT1的mRMA及蛋白水平。SIRT1沉默的
3、并且能同时抑制肝癌细胞的增殖,抑制率达70-80%;同时,SIRT1沉默能显著诱导G1期细胞周期阻滞:感染shCont的细胞处于G1期比例约(44.29±0.36)%,而感染shSIRT1-1的细胞处于G1期细胞约(69.20±1.24)%;感染shSIRT1-2的细胞G1期细胞占(65.86±1.75)%。SIRT1沉默后肝癌细胞中衰老相关的β-半乳糖苷酶染色显著增高,阳性细胞约占40-50%显著增加(P<0.05),并伴随衰老相关基因p53和p21蛋白表达增加。结论SIRT1的沉默抑制细胞增殖,并诱导了
4、细胞老化,并同时促进p53和p21蛋白的表达,提示SIRT1基因沉默可能通过p53/p21途径促进细胞衰老。[关键词] SIRT1;肝癌;老化[中图分类号] R344[文献标识码]AGenesilencingofSIRT1inhibitsproliferationandinducesSenescenceinhepatocelluarcarcinomacellsSongChunli1RenJihua1ZhangZhenzhen2TaoYing1ChenJuan11.KeyLaboratoryofMolecul
5、arInfectiousDiseases,MinistryofEducation,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400016,China2.DepartmentofInfectiousDiseases,Children'sHospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400014,China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofSIRT1silencingoncellul
6、arsenescenceinHepatocellularcarcinomacells(HCC)andthemechanism.MethodsSIRT1expressionwasdownregulatedbylentivirusexpressingshRNAtargetingSIRT1andSIRT1proteinlevelwasmeasuredbyreal-timePCRandwesternblot.CellproliferationinresponsetoSIRT1-silencingwasdetermi
7、nedbyBrduincorpationtrypanblueexclusionassayandflowcytometry.ThesenescencewasobservedbySA-β-galstainingandsenescence-associatedproteinsp53andp21werefurtheranalyzedbywesternblot.ResultsLentivirusexpressingshRNAtargetingSIRT1couldsignificantlyknockdownandSIR
8、T1expressionasmeasuredbyreal-timePCRandwesternblot.SIRT1knockdownresultedinadecreaseinproliferationandG1arrest.andIincreasedstainingofsenescence-associatedβ-galactosidasewasalsoobservedinSIRT1-silencingcellsa
此文档下载收益归作者所有