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时间:2018-07-14
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1、基础医学免疫学专业毕业论文[精品论文]中药单体MD3对树突状细胞分化发育和功能的影响及其机制研究关键词:免疫抑制剂中药单体树突状细胞趋化性受体趋化作用中药化学摘要:本课题组与之合作,从中筛选出多种对于免疫功能具有调控作用的单体成分。其中,一种对于树突状细胞(dendriticcells,DCs)的功能具有调控作用的单体MD3引起了我们的兴趣。树突状细胞是体内功能最强大的抗原提呈细胞,在免疫应答与免疫耐受中发挥着重要的作用。近年来,越来越多的研究发现免疫抑制性药物对免疫功能的抑制作用和其对于DCs功能的调节有关。本课题重点分析了中药单体MD3对DCs发育分化和功能的影响,并初步分
2、析了其作用的机制。一、中药单体MD3对树突状细胞分化发育的影响为了分析MD3对DCs发育分化的影响,我们首先应用不同浓度(0、0.4、4、20、40、80μmol/ml)的MD3处理DCs并检测了其分化发育的情况。正常培养DCs3天换液时,加入不同浓度的药物MD3,继续作用72小时候,进行一系列观察和检测。首先,进行形态学方面的观察,在显微镜下观察可见,在0-0.4μmol/m的浓度范围之内,药物MD3并不显著影响DCs的增殖,在低倍镜下观察,DCs的集落的数量、形态、大小没有显著的差异。而在20μmol/ml的浓度时,DCs的集落形态明显变小,数量上差异特别明显。在40-80
3、μmol/ml的浓度时,几乎看不到集落的形成。收集经过同样处理的DCs,进行了细胞凋亡的研究,在以Annexin-v、7-AAD和Rho123标记后,结果显示,药物MD3在药理浓度(0-0.4μmo/ml)范围内,并不显著抑制DCs的增殖。以小鼠DCs的典型标志CD11c标记小鼠,并以7-AAD去除死细胞,来观察药物处理的DCs的纯度,结果显示,在药理浓度范围内,MD3并不影响DCs的分化,仅在较高浓度和高浓度时,DCs的分化能力降低。同时,我们以4μmo/mlMD3处理正常培养3天的DCs,继续培养3天后,观察DCs表型的变化,结果显示,药物处理后的DCs的表型并没有变化,这
4、也提示MD3并不影响DCs的分化发育。我们还观察了不同时间点加入药物后,DCs的增殖况,结果显示,不同时间处理的DCs也没有显著的差异。总之,MD3对DCs的分化发育并没有显著的影响。但超过药理浓度的MD3对于DCs具有明显的促凋亡作用,表明对于该单体的结构可能还需要进一步改造以减轻其毒副作用。二、中药单体MD3对树突状细胞功能的影响及其作用机制DCs的主要功能包括吞噬功能、细胞因子的分泌功能、迁移能力以及抗原处理和提呈功能等。在本部分研究中,我们就MD3对于DCs功能的调节作用展开了研究。首先,观察了MD3对DCs吞噬能力的影响,结果显示,MD3对未成熟和成熟DCs的吞噬能力
5、都没有显著的影响。我们也检测了MD3处理后经I,PS刺激的成熟DCs的表型,结果显示没有明显的变化。在细胞因子的分泌方面,我们观察到MD3处理后的DCs的IL-10分泌增高,TNF-α和IL-12P70的表达没有明显的变化。DCs的迁移能力对于体内DCs的生物学功能的发挥也有重要的作用。在体外的趋化实验中,我们发现MD3可以抑制MIp-1α对未成熟DCs的趋化,而对MIp-3β对成熟的DCs的趋化能力没有影响。我们也对其机制进行了一些研究,结果显示,其显著降低未成熟DCs表面的趋化性受体的表达,而在成熟DCs趋化性受体CCR7的表达没有显著影响。此外,我们也观察了MD3处理的经
6、LPS刺激的DCs诱导同种异体T淋巴细胞和特异性T淋巴细胞增殖的能力,结果显示,MD3对此均具有一定的抑制作用。综上所述,本研究结果显示中药单体MD3对DCs分化发育没有显著影响,但是可以显著影响未成熟树突状细胞的趋化并促进成熟DCs分泌IL-10。这两方面的功能都表明MD3很可能具有开发和应用的前景。对于MD3作用的信号机制以及在体内是否具有免疫抑制作用,还需要进一步研究。正文内容本课题组与之合作,从中筛选出多种对于免疫功能具有调控作用的单体成分。其中,一种对于树突状细胞(dendriticcells,DCs)的功能具有调控作用的单体MD3引起了我们的兴趣。树突状细胞是体内功
7、能最强大的抗原提呈细胞,在免疫应答与免疫耐受中发挥着重要的作用。近年来,越来越多的研究发现免疫抑制性药物对免疫功能的抑制作用和其对于DCs功能的调节有关。本课题重点分析了中药单体MD3对DCs发育分化和功能的影响,并初步分析了其作用的机制。一、中药单体MD3对树突状细胞分化发育的影响为了分析MD3对DCs发育分化的影响,我们首先应用不同浓度(0、0.4、4、20、40、80μmol/ml)的MD3处理DCs并检测了其分化发育的情况。正常培养DCs3天换液时,加入不同浓度的药物MD3,继续作用
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