重组人促红细胞生成素

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1、临床上EPO不仅用于治疗肾性贫血，而且已经被应贫血的治疗8]。尽管输血由于起效快、价格低等有利因素在临床治疗中被广泛应用，但是它也存在诸多潜在危险，如感染、输血反应，严重时甚至引起死亡。而注射EPO则能有效地避免这些输血并发症。1985年，人们运用重组技术[9表达了重组人红细胞生成素(rHuEPO)。rHuEPO生产细胞株CHO2EPOC2　重组人红细胞生成素(rHuEPO)是利用基因工程技术,将人的红细胞生成素基因转入哺乳动物细胞内,高效表达的能刺激红细胞生成的糖蛋白激素,用于治疗慢性肾功能衰竭和癌症化疗产生的贫血

2、[122][1]　OhJH,HaH,YuMR,etal.SequentialeffectsofhighglucoseonmesangialcellTGF2β1andfibronectinsynthesis[J].KidneyInt,1998,54:187221878.[2]　BorderWA,NobleNA.TGF2betainkidneyfibrosis:Atargetforgenetherapy[J].KidneyInt,1997,51(5):138821396.重组EPO(rHuEPO)由于EPO在体内的作用巨

3、大而天然来源却十分有限(主要从贫血患者的尿中提取)，人们便开始利用基因重组的分子，它由不同的糖化体构成，各种糖化体的区别主要表现在糖基在整个分子中所占的比例不同，而这个比例也的作用极为相似，它一方面能够刺激骨髓造血功能，及时有效地增加红细胞的数量；另一方面能够增强机体对氧的结合、运输和供应能力，有利于在高强度竞技时改善缺氧状态，促进肌肉中氧生成，使肌肉更有力、工作时间更长，从而增强运动能力。长期使用rHuEPO，对运动员来说，可能会带来一时的荣誉，但给其健康带来的却是永久的危量过度增加，当血红蛋白含量超过55％时，血

4、液粘滞度就会增高，同时血流也会变慢。加上外界因素如运动脱水、环境压力和不合理医务监督等，当血红蛋白含量升高至65％甚至70％以上时，血流速度过慢，引起工作肌缺氧，有可能导致静脉微血栓形成，从而引起肺栓塞、中风和死亡。目前市场销售的促红细胞生成索制剂中，虽然厂家及产品名称不同(如益比奥、生血素、利血宝等)，但其结构、功能及代谢规律均非常相似。2002年盐湖城冬奥会后，NESP作为一种新型的rHuEPO类兴奋出现。重组技术生产的rHuEPO是一种酸性糖蛋白，分子量为29．8士0．3kDa，于1985年问世并成为注册药物。

5、它来启动子构建成表达载体后，以不同的细胞株[有中国仓鼠卵细胞(CH0)、幼仓鼠肾细胞(BHK)及C127小鼠纤维细3]作为受体进行表达，获取rHuEPO，所以rHuEPO的氨基酸序列与正常EPO完全相同，仅糖基部分有微小差别。由此可见，rHuEPO与EPO在结构上的不同是N-端唾液酸含量的差异[10。Caq-Darbepoetin也称新红细胞生成刺激蛋白(novele—rythropoiesisstimulatingprotein，NESP)，其商品名为Aranesp，是一种高糖基化的rHuEPO类似物口1,123。

6、Darbepoetin同样能够促进红细胞的产生，并且其不良反应发生率和死亡率都与rHuEPO相似，但Darbepoetin可能引起的高血压和凝血事件比rHuEPO少。由于它与禁药目录中的EP0有同样的功效，所以同样也属于禁用药物。Darbepoetin含有5个N一糖链和比rHuEPO多的唾液酸残基这两个额外的、包含硅酸的N一多糖链按顺序被放在EP0肽链主干的氨基酸位置上，既不改变蛋白质的结构，也不影响与受体的结合。Darbepoetin的分子量(36．8±0．4kDa)比rHuEPO大，其糖基含量也由40％增加到52

7、％[13J“。由于糖基含量的增加，它的半衰期(t。／2)比rHuEP0延长2倍，体内的药效作用时间更长久。并且，Darbepoetin有较好的代谢稳定性和较长的半衰期，持续时间比10倍剂量的rHuEPO还要长，所以可以延长给药的时间间隔，减少给药次数口“，是临床用药的又一重大突破。检测1990年，LeifWide[18,19通过研究发现虽然rHuEPO的氨基酸序列与天然EPO完全相同，但rHuEPO带的电荷与内源性EPO有所不同，这可能是因为糖化度及唾液酸化度略有区别。因此，rHuEPO与内源性EPO(huEPo)的

8、电泳行为会有所差别，这就给凝胶电泳法分离rHuEPo和huEPO带来了可能。2000年，法国国家反兴奋剂实验室的Francoise建立了等电聚焦配合以化学发光为指示剂的免疫印迹法检测外源性EPO的方法。由于rHuEPO带更多的负电荷，所以rHuEP0在等电聚焦电泳中会出现附加的碱性条带，而内源EPO则没有。通过与标准品和内源性EPO条带的对比，