水稻白叶枯病菌（xanthomonas oryzae pv. oryzae）tn插入突变体文库的构建及药剂筛选

《水稻白叶枯病菌（xanthomonas oryzae pv. oryzae）tn插入突变体文库的构建及药剂筛选》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、摘要水稻白叶枯病菌（Xanthomonasoryzaepv.oryzae）Tn5插入突变体文库的构建及药剂筛选摘要水稻白叶枯病害，是由水稻白叶枯病（Xanthomonasoryzaepv.oryzaeXoo）引起，是水稻上重要的病害。构建细菌突变体文库是进行新基因发觉与功能基因组研究的有效途径之一。为了从全基因组范围内发觉与噻枯唑作用靶标相关基因，本实验构建了Tn5转座子介导的水稻白叶枯病菌插入突变体文库。该突变体文库包含16000个细菌突变体。经验证，该突变体文库随机性、稳定性、饱和度均良好，是一个质量很高的突变体文库。噻枯唑[N，N-亚甲基-双（2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二

2、唑]，属于噻二唑杀菌剂的种类，是中国研发的，已被广泛性用于控制水稻白叶枯病和柑橘溃疡病害超过30年。噻枯唑作用的杀菌模式涉及诱导水稻水稻白叶枯病菌的抗性，抑制水稻白叶枯病菌攻击呼吸途径的任何目标，通过增加叶片脂质过氧化和超氧阴离子。由于噻枯唑具有广谱的活性活性，低毒性，它被广泛应用在中国南部。噻枯唑的广泛应用带来相应的抗药性问题。噻枯唑对水稻白叶枯病菌的作用机理目前仍不明确，本研究通过使用药剂筛选水稻白叶枯病菌突变体文库，获得对噻枯唑敏感和具有抗性的突变体菌株，实验中共获得变敏感的菌株7株，获得具有一定抗性的菌株8株。在筛选水稻白叶枯病菌突变体文库过程中，获得变敏感的菌株7株，获得具有

3、一定抗性的菌株8株。试验中测定了突变体菌株致病力，EC50等一系列表型，发现15个菌株的致病力均有不同程度的下降。通过RATE-PCR获得Tn5旁侧序列可知，抗性8个突变体插入IS家族（Transposaseandinactivatedderivatives,IS30family）、色素C氧化酶亚基II（cytochromeCoxidasesubunitII）、单链DNA特异性外切核酸酶（single-stranded-DNA-specificexonuclease）等基因中，敏感7个突变体插入信号传导组氨酸激酶（Signaltransductionhistidinekinase）、R

4、hs家族蛋白（Rhsfamilyprotein）、转座子（putativetransposase）等基因中。同时对筛选的突变体测定其胞外多糖含量和细胞膜的电导率，发现抗性菌株的胞外多糖水平下降；所有突变体的细胞膜的通透性均提高。关键词：水稻白叶枯病菌；突变体文库；噻枯唑；筛选符号及缩略说明表摘要CONSTRUCTIONOFATN5-TAGGEDMUTANTLIBRARYOFXANTHOMONASORYZAEPV.ORYZAEANDPHARMACYSCREENINGAbstractBacterialblightdamageiscausedbybacterialblight(Xanthom

5、onasoryzaepv.oryzaeXoo.),Isanimportantdiseaseofrice.Constructionofbacterialmutantgenefoundanewlibraryisoneoftheeffectivewaysandfunctionalgenomicsresearch.Tofindtheroleandthiopheneazoletargetgenesrelatedlitterfromgenome-wide,theexperimentwasconstructedTn5transposon-mediatedinsertionXanthomonasory

6、zaemutantlibrary.Thelibrarycontains16,000mutantbacterialmutants.Validated,therandommutantlibrary,stability,goodsaturationwere,isahighqualitylibraryofmutants.BismerthiazolwassynthesisedbytheSichuanInstituteofChemicalIndustryin1975,applicationshavebeendevelopedintheearly1980s,itisaFungicide,mainly

7、usedforthecontrolofricebacterialleafblight(Xanthomonasoryzaepv.oryzae)ricestripedisease(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola),citruscanker(Xanthomonascampestrispv.citri)andotherbacterialdiseases.Bismerthiazolinvitroandinvivocaninhi