实验四原子吸收分光光度法测定金属元素含量

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1、兰州理工大学现代生物仪器分析实验指导书（四年制生物工程、食品科学与工程专业）王永刚编写生命科学与工程学院二零一二年十月目录实验一、紫外吸收光谱法同时测定Vc和VE3实验二气相色谱法测定酒或酊中C2H5OH含量5实验三高效液相色谱法测定维生素B1含量7实验四原子吸收分光光度法测定金属元素含量10实验一、紫外吸收光谱法同时测定Vc和VE一、实验目的1．掌握Cary50紫外可见分光光度计的使用；2．学会用解联立方程组的方法，定量测定吸收曲线相互重叠的二元混合物。二、方法原理维生素C（抗坏血酸）和维生素E（生育酚

2、）起抗氧剂作用，即它们在一定时间内能防止油酯变酪。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧剂性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。抗坏血酸是水溶性的，生育酚是酯溶性的，但它们都能溶于无水乙醇，因此，能用在同一溶液中测定双组分的原理来测定它们。根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对应的方法来进行定量测定。如：当两组分吸收

3、峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。解联立方程组的方法是以朗伯—比尔定律及吸光度的加合性为基础，同时测定吸收光谱曲线相互重叠的二元组分的一种方法。从图中可以看出，混合组分在λ1的吸收A组分和B组分分别在λ1的吸光度之和Aλ1A+B，即Aλ1A+B=κλ1AbcA+κλ1BbcB同理，混合组分在λ2的吸光度之和Aλ2A+B应为Aλ2A+B=κλ2AbcA+κλ2BbcB若首先用A，B组分的标样，分别测得A，B两

4、组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A，κλ2A和κλ1B，κλ2B，当测得未知试样在λ1和λ2的吸光度Aλ1和Aλ2后，解下列二元一次方程组：Aλ1=κλ1AbcA+κλ1BbcBAλ2=κλ2AbcA+κλ2BbcB即可求得A，B两组分各自的浓度cA和cB。一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A，B两组分最大吸收峰处或其附近。三、仪器和试剂仪器：Cary50紫外可见分光光度计：美国瓦里安中国有限公司；石英比色皿2只；50mL容量瓶9只，；10mL吸量管2只。试剂：抗坏血酸：称3mg

5、抗坏血酸，溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于100mL；生育酚：称8mg生育酚溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于100mL四、实验步骤1.配制标准溶液（1）分别取抗坏血酸贮备液1.00、1.50、2.00、2.50mL于4只10mL比色管中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。（2）分别取生育酚贮备液1.00、1.50、2.00、2.50mL于4只10mL比色管中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。2.绘制吸收光谱以无水乙醇为参比，在320~220nm范围测绘出抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，并确定和。3.绘制标准曲线以无

6、水乙醇为参比，在波长和，分别测定步骤1配制的8个标准溶液的吸光度。4.未知液的测定取未知液5.00mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。在和分别测其吸光度。五、数据处理1.绘制抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，确定和。2.分别绘制抗坏血酸和生育酚在和时的4条标准曲线，求出4条直线的斜率，即、、和。3.计算未知液中抗坏血酸和生育酚的浓度。六、问题讨论1．今有吸收光谱曲线相互重叠的三元体系混合物，能否用解联立方程组的方法测定它们各自的含量？2．设计一个用双波长法测定本实验内容的实验方案。七、实验报告要

7、求Vc、VE紫外扫描图，四条标准工作曲线（要求编辑成WORD文档打印，并作标注）结果计算报告实验二气相色谱法测定酒或酊中C2H5OH含量一、目的要求1．学习气相色谱法测定含水样品中的C2H5OH含量。2．学习和熟悉氢火焰检测器的调试及使用方法。3．学习和掌握色谱内标定量方法。二、实验原理内标法是一种准确而应用广泛的定量分析方法，操作条件和进样量不必严格控制，限制条件较少。当样品中组分不能全部流出色谱柱，某些组分在检测器上无信号或只需测定样品中的个别组分时，可采用内标法。内标法就是将准确称量的纯物质作为内标

8、物，加入到准确称取的样品中，根据内标物的质量m。与样品的质量m及相应的峰面积A求出待测组分的含量。待测组分质量mi与内标物质量ms之比等于相应的峰面积之比。式中：fi、fs——为i组分和内标物的相对质量校正因子；Ai、As——为i组分和内标物的峰面积。三、实验用品1．仪器VarianCP3800毛细管气相色谱仪氢火焰检测器（FID）石英毛细管色谱柱（30m×0.32mm，涂层厚0.25mm）微量注射器容量瓶（50mL）吸量管（