转stnfr基因处理对供心缺血-再灌注损伤的保护作用论文

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1、转sTNFR基因处理对供心缺血/再灌注损伤的保护作用论文韩从辉郑巍董秉政郝林詹鸣李怀富张明闵志廉郑克立【摘要】目的研究可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNFR）基因直接体外灌注转染供者器官的效果，利用小鼠异位心脏移植模型探讨sTNFR基因转染对供心缺血/再灌注损伤的保护机制。方法实验分3组，每组C57/BL6（H-2Kb）供体鼠和BalB/c（H-2Kd）受体鼠各10只，在0～4℃溶液中对3组C57/BL6（H-2Kb）小鼠的供心分别经主动脉缓慢灌注含编码小鼠sTNFR-p55基因的复制缺陷重组腺病毒载体（AdmsTNFR组）、复制缺陷重组腺病毒载体AdHCVsp1LacZ（AdmLac

2、Z组）的PBS和单纯PBS(对照组)，灌注1h后，将供心移植给BalB/c（H-2Kd）受体鼠。检测各组移植受体鼠外周血血清sTNFR的表达水平和移植物浸润细胞(GIC)的数量，并分析AdmsTNFR基因修饰后GIC的同种反应活性（MLR）。结果以2×1012pfu/L的滴度转染移植心脏后，12h即可在AdmsTNFR组小鼠的血清中检测到高水平的sTNFR-p55表达.freelLacZ组24h的sTNFR-p55水平为(1.5±0.56)μg/L（P0.05），对照组更低；术后14天，AdmsTNFR组仍持续表达有效高水平的sTNFR-p55〔(20.1±3.7)μg/L〕。Ad

3、msTNFR组移植心脏的GIC数目为(0.5±0.12)×106/孔，明显低于对照组和AdmLacZ组的（5.0±2.2）×106/孔（P0.05），其比例为1∶10～1∶20。将不同组的GIC与γ射线(20Gy)灭活的供体鼠来源的T细胞作72hMLR，AdmsTNFR组的GIC增殖受到了明显的抑制，AdmLacZ组和对照组的GIC则显示较强的对同种刺激的增殖活性。结论在低温（0～4℃）的条件下可以将编码sTNFR基因的腺病毒成功地转入移植心脏，通过基因表达可长时间维持有效的sTNFR-p55的局部浓度，减轻了受体鼠移植器官内的炎性细胞浸润，并抑制移植器官内浸润细胞的同种反应活性。

4、【关键词】sTNFR；转基因；器官移植；心脏；缺血/再灌注损伤；小鼠Abstract:ObjectiveToinvestigatethetransfectioneffectsofsTNFRgenedirectlyperfusedtodonorheartsinvitro,andtoexploretheprotectivemechanismofsTNFRgenetransductiontodonorheartsagainstischemia-reperfusioninjuryusingthemodelofheterotopichearttransplantationinmice.Met

5、hodsTheexperimenticeand10recipientmice.ThedonorheartsurinesTNFR-p55(forAdmLacZsTNFRgenegroup),replication-defectiveadenovirusvectorAdHCVsp1LacZ(forAdmLacZvectorgroup)andPBS(forcontrolgroup)respectively,for1h,beforethedonorheartsethod.ThesTNFR-p55levelinserumandthegraftinfiltratingcell(GIC)coun

6、tineachrecipientgroupined,oftheAdmsTNFRgenegroup12hoursafterthetransfectionatMOI2×1012pfu/L,LacZvectorgroupuchlo14daysaftertransplantationinAdmsTNFRgenegroup.TheGICcountinAdmsTNFRgenegroupsuchloLacZvectorgroup(5.0±2.2)×106/phocytesfromdonormicefor72hMLR,theproliferationofGICsTNFRgenegroup,aspa

7、redediatedsTNFR-p55genecanbetransferredsuccessfullytocardiacallograftsbydirectperfusionunderhypothermicconditions(0-4℃)invitro,ia/reperfusioninjury;mice器官保存在维持离体器官的功能方面起着最为重要的作用。在器官切取后等待移植手术的时间内，供器官质量的好坏直接影响到外科手术后移植器官的功能恢复。缺血/再灌注损伤(isch