姜黄素与sti571联合及序贯给药对k562细胞增殖的影响论文

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1、姜黄素与STI571联合及序贯给药对K562细胞增殖的影响论文【摘要】目的研究姜黄素(Cur)与STI571联合应用对慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562增殖的影响,探索两药序贯给药的不同效果。方法锥虫蓝排染计数计算K562细胞增殖抑制率;显微镜下观察Cur与STI571联合应用对K562细胞的细胞毒作用;锥虫蓝排染法检测药物序贯给药的不同效果;金氏公式评价两药的协同效果。结果Cur与STI571单独作用均抑制K562细胞的增殖,二者联合应用呈协同作用(Q1.15);显微镜下可见0.4μmol/LSTI571与5μmol/LCur联合应用

2、对K562细胞毒作用强于单独应用;先给予STI571作用24h,再给予Cur作用24h,对K562细胞的抑制呈协同作用(Q1.15),而先给予Cur作用24h,再给予STI571作用24h,则呈单独相加或拮抗作用(Q1.15)。结论Cur与不同浓度的STI571(0.1~0.4μmol/L)联合应用可协同抑制K562细胞增殖;联合应用STI571和Cur时,先给予STI571再给予Cur比先给予Cur再给予STI571协同效果好。【关键词】中草药姜黄素K562细胞白血病髓样慢性药物疗法,联合慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenou

3、sleukemia,CML)是以费城染色体(Ph)为特征的多潜能干细胞异常的骨髓恶性增殖性疾病。在我国,CML约占各类白血病的15%~20%,仅次于急性粒细胞白血病(AML)和淋巴细胞性白血病(ALL),.freelatinibmesylate),具有独特的作用机制和高效的特异性,在临床上被广泛应用。但是,随着该药的广泛应用,其不良反应及耐药问题相继出现。因此,协同用药成为目前研究STI571的一大热点。姜黄素(curcumin,Cur)具有抗肿瘤、抗炎、抗血小板聚集等广泛的药理作用及毒性小等特点23,与较小剂量STI571(0.1~0.1

4、5μmol/L)联合应用对抑制K562细胞增殖呈单独相加,而与较大剂量STI571(0.2~0.8μmol/L)可明显协同下调P210bcr/abl和PKC的表达水平4。笔者进一步探讨不同剂量的STI571与Cur联合应用对K562细胞增殖的影响及序贯给药产生的不同效果。1材料与方法1.1材料1.1.1药品与试剂姜黄素(上海试剂三厂,批号980825),纯度99%,溶解于二甲基亚砜(DMSO),配成20mmol/L储存液于-20℃储存备用。STI571(瑞士诺华公司)经本研究所萃取、重结晶所得,纯度99%,溶解于DMSO,配成10mmol/L

5、,于-20℃储存备用。1.1.2细胞株及培养条件人CML细胞株K562(中国科学院上海细胞研究所),培养于含10%小牛血清、1×108U/L青霉素及100mg/L链霉素的RPMI1640培养液,在37℃、体积分数为0.05的CO2中培养。细胞接种24h后进入指数增长期。1.2方法1.2.1Cur和/或STI571对K562细胞的影响取指数增长期的K562细胞100μL(2~4)×109L-1加入96孔板中,每个加药组设3个复孔,分别设空白组,Cur2.5,5,10,20μmol/L,STI5710.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2μ

6、mol/L的单独作用浓度以及STI5710.1,0.2,0.4μmol/L与Cur5μmol/L联合作用浓度,给药后各孔终体积相同。将培养板置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养,24h后用锥虫蓝排染计数，计算抑制率。抑制率=(空白组-实验组)/空白组×100%1.2.2Cur和/或STI571对K562细胞的细胞毒作用取指数增长期的K562细胞100μL(2~4)×109L-1加入96孔板中,每个加药组设3个复孔,分别设空白组,Cur5μmol/L,STI5710.4μmol/L单独作用浓度以及二者联合作用浓度,给药后各孔终体积

7、相同。将培养板置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养,24h后显微镜下观察细胞的存活情况。1.2.3序贯给药取指数增长期的K562细胞100μL(2~4)×109L-1加入96孔板中,每个加药浓度设3个复孔,分别设空白、Cur5,10μmol/L、STI5710.05,0.1,0.2,0.4μmol/L的给药浓度.freelol/L作用24h,然后给予不同浓度Cur作用24h;以及细胞先给予不同浓度Cur作用24h,再给予STI5710.1,0.2,0.4μmol/L作用24h。将培养板置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱

8、中培养,待药物作用时间结束用锥虫蓝排染计数。1.3统计学处理数据用x±s表示,组间差异用t检验。计算两药联合应用时,用金氏公式求协同指数（Q值）5。2结果2.1Cu