资源描述：
《南瓜蛋白与sti571体外联合抗k562细胞的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、南瓜蛋白与STI571体外联合抗K562细胞的作用【摘要】目的探讨南瓜蛋白与STI571对K562细胞增殖的抑制作用及其机制。方法用MTT检测南瓜蛋白与STI571单用或联合作用对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞的凋亡率;Westernblot检测药物对p210Bcr-Abl蛋白的影响。结果南瓜蛋白与STI571联合作用协同抑制K562细胞增殖(q>1.15);协同诱导K562细胞凋亡;协同抑制p210Bcr-Abl蛋白表达。结论南瓜蛋白与STI571联合作用体外协同抗K562细胞的增殖。【关键词】南瓜;K562细胞;植物蛋白类;受体蛋白质酪氨酸激酶类;细胞增殖AB
2、STRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectandmechanismofcucurmosinandSTI571onK562cellgrowth.MethodsMTTwasusedtoevaluatethegrowthinhibitoryeffectofcucurmosinandSTI571.FCMwasusedtodetecttheapoptoticrateinducedbycucurmosinandSTI571.Westernblotwasusedtoinvestigatetheeffectofp210Bcr-Ablinducedbycucurmosinan
3、dSTI571.ResultsCucurmosinandSTI571exertedasynergisticinhibitoryeffectonK562cellgrowth(q>1.15).FCMshowedthatcucurmosinandSTI571alsoexertedasynergisticapoptotic10effectonK562cells(q>1.15).WesternblotindicatedcucurmosinandSTI571synergisticallyinhibitedtheexpressionofp210Bcr-Abl.ConclusionCucurmo
4、sinenhancesSTI571ininhibitionofK562cellgrowth.KEYWORDS:Cucurmobitamoschata;K562cells;plantproteins;receptorprotein-tyrosinekinases;cellproliferation南瓜蛋白(cucurmosin)是从南瓜瓤中提取的I型核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingprotein,RIP),相对分子质量约27kD,为碱性单肽链糖蛋白,具有抗肿瘤和促分化作用［1-4］。STI571(Gleevec,CGP57148B,imatinibmesylate)是
5、Bcr/Abl融合蛋白酪氨酸激酶(proteintyrosinekinase,PTK)活性的竞争性抑制剂,临床上用于治疗Bcr/Abl表达阳性的慢性粒细胞白血病(CML)和急性淋巴细胞白血病(ALL),疗效显著［5-6］。笔者探讨南瓜蛋白与STI571联合抗K562细胞的作用及其机制。1材料与方法1.1材料101.1.1药品与试剂南瓜蛋白由本课题组制备,纯度>95%。STI571(瑞士诺华公司)经萃取、重结晶所得,纯度达99%,溶解于DMSO中,配成10mmol/L,于-20℃储存备用。抗c-Abl抗体(美国SantaCruz公司)。1.1.2细胞株及培养条件人慢性粒细胞白血病细胞株K
6、562(中国科学院上海细胞研究所),培养于含10%小牛血清、1×108U/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI1640培养液,在37℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养。细胞接种24h后进入指数增长期。1.2方法1.2.1南瓜蛋白单独或联合STI571对K562细胞的抑制作用K562细胞悬液200μL［(2～4)×109L-1］,加入96孔板中,分别设空白组、不同浓度药物组及加等量溶剂阴性对照组,每个浓度重复4孔,无细胞孔为背景,各孔终体积相同。将培养板置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱培养48h,以MTT法测定联合用药对细胞增殖的抑制作用。1.2.2南瓜蛋白联合STI57
7、1诱导K562细胞凋亡的作用收集药物处理的细胞,根据凋亡检测试剂说明书操作;流式细胞仪(FCM)分析凋亡细胞百分率(sub-G1%)。101.2.3Westernblot检测K562细胞p210Bcr-Abl蛋白表达收集单用或联用药物处理的细胞,根据分子克隆实验指南［10］,提取细胞质总蛋白,经SDS-PAGE电泳分离,转膜,封闭和印迹。一抗为抗c-Abl单抗,二抗为碱性磷酸酶交联的抗体。1.3统计学处理评价
