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1、探讨慢性萎缩性胃炎癌前病变中医病机演变规律 慢性萎缩性胃炎(CAG)是指胃黏膜固有腺体的萎缩,同时伴有胃酸及胃蛋白酶分泌减少的一种退行性病变[1].因其与胃癌的发生关系密切,特别是CAG伴有不典型增生和/或肠腺化生改变者,故其称为癌前病变已被公认,越来越受到人们重视[2].TRPV1、TRPM8均为瞬时电位受体,是一种膜受体,在消化道分布广泛[3-4],且其具有中医的寒热性规律[5].CAG具有发病机制不确切,治疗效果不佳的特点,而中医药探求其发病机制及防治手段,阻断其向癌症发展以减少胃癌发病率成为了国内外学者关注的热点.本研究目的是将中医宏观证
2、型与西医微观检测指标的结果进行有机结合,通过观察CAG癌前病变的病理变化与中医证型及瞬时电位受体(TRPV1、TRPM8)的相关性,探讨CAG癌前病变中医病机演变规律,为本病宏观辨证提供微观量化指标及临床治疗用药提供科学依据. 1临床资料 1.1一般资料所有入选病例均为2008年1月-2012年12月在我院就诊的门诊及住院治疗的患者,经电子胃镜检查及胃黏膜病理组织活检证实为CAG伴不典型增生和/或肠上皮化生患者317例,经常规体检无症状性浅表性胃炎10例作为对照组,观察对象共327例,其中男172例,女155例;年龄33~70(52.64&pl
3、usmn;8.47)岁;病程(8.51±4.18)a(3个月~36a). 1.2诊断标准CAG诊断标准参照2006年上海中国慢性胃炎共识意见[6];中医证型判断标准根据中西医结合学会消化系疾病专业委员会于2003年拟定的《慢性胃炎中西医结合诊治方案》[7]进行辨证分型,分为肝胃不和证、脾胃湿热证、脾虚气滞证、脾胃虚弱(寒)证、胃阴不足证、胃络瘀阻证6型. 1.3研究方法 1.3.1胃镜检查所有患者在我院内镜室由有多年胃镜操作经验的资深医师行胃镜检查明确诊断,取活体组织检查者以幽门为中心,采用钟表法,分别在距幽门4cm12,3,6
4、,9点钟取黏膜活检标本各1块,其中2块送病理科进行病理检查,剩余组织立刻置液氮冷冻封存. 1.3.2组织学诊断病理标本均经我院高年资病理医师证实.病理诊断基于HE染色,根据世界卫生组织(8的表达应用即时逆转录PCR(re-al-timeRT-PCR)技术.提取黏膜总RNA(Trizol,GibcoBRL公司).②逆转录:在20μL反应体系中,将1μgRNA逆转录为cDNA.PCR(20μL体系)反应条件:预变性95℃5min、95℃30s、60℃30s、72℃30s(30个循环)、终末延伸72℃10min.③即时PCR:采用定量
5、PCR中的相对定量法,以β-actin作为内参照.引物序列见表1,由北京奥科生物技术有限责任公司合成.同时以浅表性胃炎黏膜为基准.扩增产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳,加样量为8μL,电压160V,时间25min,电泳完毕后在溴化乙啶(EB)中染色,在紫外灯下观察结果并照相.图像采用QuantityOne软件测定各条(TRPVl、TRPM8)的灰度值,比较二者的比值. 1.4观察指标观察萎缩性胃炎癌前病变中医证型分布规律,各证型与TRPV1、TRPM8表达关系;中医证型与胃黏膜肠上皮化生的关系;中医证型与胃黏膜异型增生的关系;中医证型
6、与胃黏膜萎缩程度的关系. 1.5统计学方法建立数据库,使用SPSS13.0软件,应用卡方检验对调查数据进行分析处理.检验水准α=0.05和0.01. 2结果 2.1证型分布规律情况脾胃虚弱66例(20.8%),肝胃不和45例(14.2%),脾胃湿热79例(24.9%),脾虚气滞82例(25.9%),胃络瘀阻17例(5.4%),胃阴不足28例(8.8%).其中胃阴不足与胃络瘀阻两型和其他证型相比有显着性差异(P均<0.05). 2.2TRPV1、TRPM8表达与证型关系327例样本中,均进行TR-PCR定量分析,结果显示6种
7、证型的TRPV1、TRPM8表达水平比较存在显着性差异.TRPV1表达的中医证型排序为脾胃湿热>胃阴亏虚>肝胃不和>胃络瘀阻、浅表性胃炎>脾虚气滞>脾胃虚弱;TRPM8表达的中医证型排序为脾胃虚弱>脾虚气滞>胃络瘀阻、浅表性胃炎>肝胃不和>胃阴亏虚>脾胃湿热.TRPV1以脾胃湿热表达最为明显415bp,TRPM8表达以脾胃虚弱最明显为387bp.胃络瘀阻型近似于浅表性胃炎胃黏膜表达.见图1. 2.3中医证型与胃黏膜肠上皮化生的关系同一证型不同程度肠上皮化生情况比较具有非常显着性差异(P均
8、<0.01),不同证型肠上皮化生程度比较存在非常显着性差异(P<0.05或0.01).以胃阴不足、胃络瘀阻及脾