鲤鱼鳞被发育基因eda、edar克隆及表达定位初步研究

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1、鲤鱼鳞被发育基因EDA、EDAR克隆及表达定位初步研究第一章引言1.1鱼类的鳞鳞通常是指覆盖在鸟类，爬行类腿部表面源于表皮的附属物，和于鱼类真皮位于鱼类皮肤中的于真皮的结构。尽管两种鳞都分布在体表，并且都整齐的排列，但是无论是它们的形态，组织还是进化的起源都是不同的，因此，涉及到鳞时，鳞的类型要进行详细的说明。硬骨鱼的大多数鳞是圆鳞栉鳞，如罗非鱼，青鳉，斑马鱼和鲤鱼，它们都是鳞的高度派生类型。在相关文献中，鱼类的鳞通常指的是水生脊椎动物皮肤中所有坚硬的，平扁的骨质物。例如软骨鱼类（鲨，鳐）具有的盾鳞，硬鳞鱼类（鲟形类，弓鳍鱼类，雀鳝类，多鳍鱼类）

2、具有的硬鳞，以及大多数硬骨鱼类具有的骨鳞，而其中骨鳞又可分为圆鳞（鲤）和栉鳞（鲈）。虽然它们的鳞在进化关联上都是通过共同的祖先衍化而成，但是他们却具有不同的结构。并且有一些被称为鳞的物质其结构与牙齿更加接近而与其他的鳞的类型不同。比如盾鳞覆盖于表皮上的一些真皮部分。因此，在当前的发育比较研究中，也有人建议用皮肤牙这一词语替换盾鳞。皮肤牙据研究存在于5亿多年前的早期脊椎动物中，它具有类似于牙一般的结构，被认为可能是现存的所有脊椎动物的真皮骨架部分的祖先。有科学家认为盾鳞是唯一几乎没有改变状态的皮肤牙的家族。虽然鱼类有不同的鳞被发育模式，但是它们在发

3、育上有共同的特征[1]：迄今为止所有鱼的鳞被发生时间都是很晚的，一般都是在变态发育后，鳞被的这种延迟形成的现象不仅仅表现在硬骨鱼上，而且在皮肤骨鳞的鱼类中也有报道，例如甲鲶鱼[2]（armouredcatfish）。尽管鳞被在发生学上是相对较晚的，但是软骨鱼类和硬骨鱼类鳞被建立的模式不同，其中软骨鱼类中的鲨鱼是在一个特定的范围内同时长出大量的皮肤牙（odontodes），并且是随机分布的；硬骨鱼中的很多种类，如斑马鱼，表现为在某个地方长出第一片起始鳞片，其它的鳞片在临近起始鳞片处快速连续地成排形成，并且遵循特定的模式直至最后形成了代表着一定鳞片模

4、式的全身鳞被（图1-1A）。.1.2鳞被发育过程研究进展大部分硬骨鱼类的身体被覆鳞被，它们和牙齿、鳍条一样都属于真皮骨架，这些皮肤的衍生物表现出多样性的组织：不同的骨骼、牙齿、珐琅质[4][5]。鱼鳞占鱼体重的2-3%，含水量平均为17%，含有较多的卵磷脂和较多的不饱和脂肪酸，可以减少胆固醇在血管壁的沉积，起到预防高血压和心脏病的作用；鱼鳞为鱼体提供了一道天然的保护性屏障，可以将病原菌与之隔绝，有效地避免感染；生物学功能上，鱼鳞可以使得鱼体保持一定的外形，减少与水体的摩擦，具有很重要的生物学意义。在相当长的一段时间内，由于鱼类的皮肤中含有丰富的胶

5、原蛋白，而且厚鱼皮可以成为皮革的，鱼皮肤的组织、结构和组成一直是比较吸引水产研究者的注意，但有关鱼类皮肤发育的信息还是很少的。直到最近，尽管已经有很多分子生物学的工具可以利用，但是在分子水平上对于皮肤发育的机制和皮肤附属物发育的模式还是知之甚少，即使是在模式生物斑马鱼（Daniorerio）和青鳉（Oryziaslatipes）上也是如此。利用哺乳动物和禽类的皮肤、皮肤附属物作为模式的研究目前已经有很多解剖学的结果。但是鳞被的组成、分化以及特化过程的分子机制研究的结果不多，同时由于鳞被的发育与鱼类的尺寸和年龄有很好的相关性，因此目前有关鳞被的研究

6、主要集中在以下几个方面：（1）鳞片的大小和年龄之间关系的研究；（2）鳞片模式形成的研究；（3）皮层细胞-间质细胞相互作用的细胞学基础，鳞被发生和形成过程中真皮和表皮细胞的互作关系。..第二章材料与方法2.1实验用鱼的获得及喂养管理德国镜鲤（GermanyMirrorCarp）来自中国水产科学研究院黑龙江水产研究所松浦实验基地，建鲤（monCarp）来自中国水产科学研究院无锡淡水研究中心。仔鱼在玻璃缸中以草履虫为开口饵料，逐渐转化成卤虫无节幼体饲养。根据需要选择鲤鱼的实验材料。养殖亲鱼水温：16℃，且保持稳定。选取催产亲鱼要求：发育优良，体表无伤，

7、身体光滑且能正常活动，体重1-3kg左右。父本要求：轻按鱼腹有乳白色精液出现。腹部较小，且胸、腹鳍和鳃盖处清晰出现副性征-追星。生殖孔及肛门内凹，无红肿现象。母本:腹部柔软且呈现圆囊行，生殖孔和肛门较大，微红且突出。催产采取注射法，注射部位:体腔胸鳍基部。单次注射，剂量视情况而定，但父本比母本用量减半。使用医用胶布在注射器针头的基部缠绕几圈以控制刺入鱼体深度。刺入深度:1cm左右。完成后暂时放入鱼池养殖。采取干法授精。将到达发情高潮期的亲鱼捕出取卵。未免鱼卵流出，需使鱼头朝上尾朝下，病堵住生殖孔。取卵时，需先将亲鱼腹部擦干，握住鱼尾，从腹部后方逐

8、渐向前按压。将卵挤入干净且无水的不锈钢盆中。为防止鱼卵遇水膨胀，降低受精率，因此尽量不要使水进入盆中。再将雄鱼精液挤在鱼卵上，轻柔的用搅