饲料蛋白含量对中华鳖日本品系稚鳖生长和消化酶的影响

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1、饲料蛋白含量对中华鳖日本品系稚鳖生长和消化酶的影响　　消化酶是生物体内催化各种生化反应的一类特殊的蛋白质，主要作用是消化和分解生物体从外界所摄取的食物，为其生长和发育提供营养物质。水产动物消化酶特性研究是水产动物消化生理研究的重要内容，也是研发专用配合饲料的基础。已有研究表明，水产动物消化酶的分泌受到遗传、食性、年龄、环境以及饲料因素的影响，其中饲料的营养组成，如蛋白质水平，是决定其生长最关键的营养物质，也是影响消化酶活性的重要因素。　　中华鳖日本品系(Pelodiscussinensis，Japanesestrain)(农业部品种登记号:GS03-001-200

2、7)具有遗传性状稳定、生长速度快、抗病力强、营养价值高、养殖经济效益好等众多优点，逐渐受到国内外市场的欢迎。目前，浙江省中华鳖日本品系良种稚鳖的年生产数量为6500万只，年均增长速度达60%，养殖前景十分广阔。然而，对这一中华鳖新品系的研究多集中在种质和养殖模式方面，关于营养生理的研究较少。饲料蛋白质是水产动物生长必需的营养物质，也是饲料最主要和最昂贵的组成部分，鉴于中华鳖产业生态健康发展的需要，本文拟开展饲料不同蛋白水平对中华鳖日本品系稚鳖生长和消化酶的影响研究，以期为中华鳖日本品系高效环保配合饲料研发提供理论参考。　　1、材料与方法　　1．1供试动物与饲料　　

3、供试动物:中华鳖日本品系由杭州萧山天福生物科技有限公司提供。试验用稚鳖为刚孵化出来尚未开口摄食的稚鳖，规格一致、健康无病。　　供试饲料:试验原料由宁波天邦股份有限公司提供。以3%为梯度，分别配置蛋白含量为34%(D1)、37%(D2)、40%(D3)、43%(D4)和46%(D5)共5组试验饲料，并相应调整饲料中玉米油和α－淀粉的含量，以保持各组试验饲料总能大致相等。将试验原料过100目筛后准确称重，采用逐级扩大法将微量成分与其他饲料原料混合均匀，手动搅拌5min，再放到搅拌机搅拌15min，将预先混合均匀的玉米油缓慢添加到正在搅拌的预混合料里;接着往

4、预混合料添加40%左右蒸馏水，继续搅拌15min;使用中华鳖专用饲料机，生产试验颗粒饲料。将做好的饲料破碎、过筛，再用塑料袋按组别分装密封，置于－20℃冰柜保存备用。饲料配方和营养成分实测值如表1所示。　　1．2养殖试验　　经过2周驯食后，选取体质健康、规格均匀的稚鳖225只(初始体重3.70±0.05g)，随机放入15个室内养殖箱中(箱体积350L个－1)，每个箱内放养15只鳖，随机投喂D1～D5试验饲料，每组饲料对应3个重复。养殖箱内一端放置塑料斜坡和平台作为饲料投饵台，加水高度至25cm，并使用小型增氧机和气石进行增氧。饲养试验期间，每日投饲量

5、为鳖体重3%左右，分两次投喂(上午8∶30和下午5∶30)，确保饲料在1h左右能被试验鳖基本摄食完毕。残饵及时清理、烘干并称重，用于计算饲料系数。每周换水两次，换水量为箱内水体积1/3。养殖期间水温保持在29±1℃。在正式养殖试验开始前，试验鳖用混合试验饲料预先饲喂2周。正式养殖试验8周。　　1．3样品分析与数据计算　　　　饲养试验结束后停喂24h，将试验中华鳖逐一测量外形数据，称量体重，再用断头法处死，立即解剖，迅速取出所有内脏，置于冰块中，分离出胃、肠道和肝脏。剪开胃和肠道，用冰冻双蒸水冲洗胃和肠道内壁，经脱脂棉球轻轻擦拭干净后，小心刮下黏膜。将

6、获得的样品放入匀浆器，同时将匀浆器外套置于冰水中，加入9倍去离子水，低温下匀浆。匀浆液经高速冷冻离心机(3000rmin－1)离心10min，所得上清液即为消化酶样品，置于－20℃冰箱中保存，相关酶活性指标在3d内测定完毕。　　组织消化酶活性使用试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定。具体指标如下:酶液蛋白浓度采用考马斯亮蓝法进行测定，基本测定原理是蛋白分子具有－NH3+基团，当棕红色的考马斯亮蓝显色剂加入蛋白标准液或样品中时，考马斯亮蓝染料上的阴离子与蛋白－NH3+结合，使溶液变为蓝色，在595nm波长下测定OD值可计算出蛋白质浓度。计算公式:总蛋白质浓度/(gL

7、－1)=(测定管吸光度－空白管吸光度)/(标准管吸光度－空白管吸光度)标准管蛋白质浓度(0.563gL－1)。　　胃蛋白酶活性定义为:每毫克组织蛋白在37℃每分钟分解蛋白生成1μg氨基酸为1个酶活单位。　　胰蛋白酶活性定义为:在pH8.0，37℃时每毫克组织蛋白中含有的胰蛋白酶每分钟使反应体系吸光度变化0.003为1个酶活单位。　　脂肪酶活力定义为:在37℃时每克组织蛋白在反应体系中与底物反应1min，每消耗1μmol底物为1个酶活单位。　　淀粉酶活力定义为:每毫克组织中蛋白在37℃与底物作用30min，水解10mg淀粉定义为1个酶活单位。　　相关参数

8、指标计算公