snt 2099-2008 进出口食品中绿脓杆菌检测方法

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２０９９—２００８进出口食品中绿脓杆菌检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犪犲狉狌犵犻狀狅狊犪犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２００８０７１７发布２００９０２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２０９９—２００８前言本标准的附录Ａ、附录Ｂ均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：郑晶、黄晓蓉、赵贵明、翁国柱、

2、吴芸芸、郑麟毅、陈彬、邵碧英。本标准系首次发布的出入境检验检疫标准。Ⅰ犛犖／犜２０９９—２００８进出口食品中绿脓杆菌检测方法１范围本标准规定了食品中绿脓杆菌的定性和定量检测方法。本标准适用于各类食品中的绿脓杆菌检测，可参考此法检测水的绿脓杆菌。２规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ４７８９．２８—

3、２００３食品微生物学检验染色法、培养基和试剂ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３术语和定义下列术语和定义适用于本标准。３．１绿脓杆菌属假单胞菌属（狆狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊）亦名为铜绿假单胞菌，具荚膜、鞭毛，为无芽胞的革兰氏阴性杆菌，能分解蛋白质，发酵糖类能力较低，能产生两种水溶性色素：一种是绿脓菌素，为蓝绿色的吩嗪类化合物，无荧光性，另一种为荧光素，呈绿色。４设备和材料４．１恒温培养箱：３６℃±１℃、４２℃。４．２显微镜：带油镜头。４．３均质器。４．４高压灭菌器。４．５天平：精度０．１ｇ。４．６ＶＩＴＥＫ全自动微生物鉴定系统

4、或类似设备。注：ＶＩＴＥＫ是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。４．７吸管：１ｍＬ，分刻度０．１ｍＬ；１０ｍＬ，分刻度１ｍＬ。４．８可调移液器：１０μＬ～１００μＬ，１００μＬ～１０００μＬ。４．９试管：１５ｍｍ×１００ｍｍ。４．１０灭菌平皿：直径９０ｍｍ，底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平皿。４．１１灭菌的样品处理器具：镊子、剪刀、勺子。４．１２质控菌株：绿脓杆菌标准菌株ＡＴＣＣ９０２７，恶臭假单胞菌ＡＴＣＣ４９１

5、２８或其他经过验证的具有相同生物学特征的同类菌株。５培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２的规定。５．１ＳＣＤＬＰ增菌液：见第Ａ．１章。５．２磷酸盐缓冲稀释液：见第Ａ．２章。１犛犖／犜２０９９—２００８５．３假单胞菌ＣＦＣ选择性培养基：见第Ａ．３章。５．４假单胞菌ＣＮ选择性培养基：见第Ａ．４章。５．５氧化酶试验：按ＧＢ／Ｔ４７８９．２８—２００３中３．１８规定。５．６乙酰胺培养基：见第Ａ．５章。５．７葡萄糖酸盐培养基：见第Ａ．６章。５．８精氨酸双水解酶培养基：见第Ａ．７章。５．９硝酸盐蛋白胨水培

6、养基：见第Ａ．８章。５．１０明胶培养基：见第Ａ．９章。５．１１赖氨酸脱羧酶培养基；见第Ａ．１０章。５．１２营养琼脂：见第Ａ．１１章。５．１３ＡＰＩ２０ＮＥ测试条。５．１４ＧＮＩ＋测试卡。注：ＡＰＩ２０ＮＥ测试条和ＧＮＩ＋测试卡是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。６检验程序６．１方法提要食品中绿脓杆菌的检验方法是通过选择性增菌、分离、生化鉴定等方法对食品中可能存在的绿脓杆菌进行定性和定量的检验。６．２检验程序绿脓杆

7、菌的检验程序见图１。图１绿脓杆菌检验程序示意图２犛犖／犜２０９９—２００８７检验步骤７．１样品的存放如为冷冻样品，应于２℃～５℃解冻，且不超过１８ｈ，若不能及时检验，应置于小于－１５℃保存。非冷冻的易腐样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于４℃冰箱保存，并在２４ｈ内检验。７．２绿脓杆菌定性检验７．２．１按无菌操作取检样２５ｇ（２５ｍＬ）至２２５ｍＬＳＣＤＬＰ增菌液中，充分摇匀，于３６℃±１℃培养２４ｈ±２ｈ。７．２．２接种ＳＣＤＬＰ增菌培养物按７．４进行分离鉴定。７．３绿脓杆菌定量检验（犕犘犖法）７．３．１无菌操作取样品２５ｇ

8、（２５ｍＬ），放入灭菌均质杯或均质袋中，加２２５ｍＬ灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲稀释液，均质混匀，制成１∶１０稀释液。７．３．２用１０ｍＬ灭菌吸管吸取１∶１０稀释液１０ｍＬ，加入装有９０ｍＬ灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲稀释液的广口瓶中，混合均