复合型组织工程皮肤的体外快速构建

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1、复合型组织工程皮肤的体外快速构建?406?ChineseJournalofReparativeandReconstructiveSurger!垒!!:!!:!:!:复合型组织工程皮肤的体外快速构建杨斌洪清琦丘日升张琳董Yl桐【摘要】目的寻找一种体外快速构建复合型组织工程皮肤的方法,为大面积烧伤,创伤创面的覆盖提供足够的自体皮源.方法取人的包皮,进行表皮细胞及成纤维细胞的分离鉴定及体外培养扩增,对表皮细胞群行广谱角蛋白抗体一异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC),角蛋白19(cytokeratin19,K19)一FITC免疫荧光染色及

2、K19流式细胞仪鉴定;对成纤维细胞行波形蛋白一FITC免疫荧光鉴定.将表皮细胞接种于异体脱细胞真皮(acellulardermalmatrix,ADM)乳头面,于气一液平面培养构建表皮层,实验分两组进行,实验组培养基中添加25ng/ml角化细胞生长因子(keratinocytegrowthfactor,KGF),对照组不添加.6d后,接种成纤维细胞于两组ADM的另一面,继续培养24h.收集构建的组织工程皮肤,切片行苏木素一伊红染色,观察所构建皮肤的镜下结构,并对比添加KGF对其影响.结果免疫荧光染色培养扩增的表皮细胞群广谱角蛋白抗体一FITC染色均为阳性,K19一FITC

3、染色部分阳性,流式细胞仪鉴定其中K19阳性表达的细胞接近17.成纤维细胞体外培养7d可扩增超过100倍,波形蛋白一FITC免疫荧光染色呈阳性.经过7d的体外培养构建,可以得到复合型皮肤,经苏木素一伊红染色镜下观察显示,实验组表皮层连续,形成细胞层数2～3层的复层结构,真皮中含有成纤维细胞;对照组表皮层不连续,细胞层数少,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论利用胶原酶结合胰蛋白酶消化法进行种子细胞的分离,应用添加KGF的条件培养基,采用分步接种构建的方法,可在7d内构建出复合型组织工程皮肤【关键词】组织工程皮肤体外快速构建中图分类号:R318.08Q813.

4、1文献标识码:AFASTRECONSTRUCTIoNOFCOMPOSITETISSUE—ENGINEEREDSKININVITRO/YANGBin,H0NGQingqi,OJURisheng,eta1.DepartmentofPlasticSurgery,SecondAffiliatedHospital,SunYat—SenUniversity,Guangzhou,510120,P.R.China.E—mail:ybdoctorsysu@163.cornCorrespondingauthor:YANGBin,E—mail:ybdoctorsysu@163.corn[Abs

5、tractlObjectiveTofindafeasiblemethodthatcanreconstructthecompositetissue—engineeredskinfastinvitroandcanprovideenoughskinassoonaspossibleforcoveringthesurfaceofthelarge—areaburn.MethodsTheforeskinwastakenduringtheposthectomy.Theepidermalcellsandfibroblastswereisolated,identifiedandculture

6、d.Thecytokeratin19(K19)flowcytometryandthefluoresceinisothiocyanate(FITC)一immunofluorescenceforK19andtheFITC—immunofluorescenceforPAN—cytokeratinoftheepidermalcellsandtheFITC—immunofluorescenceforvimentinofthefibroblastswereperformedtoidentifytheepidermalcellsandthefibroblasts.Then,theepi

7、dermalcellswereseededontothepapillarysurfaceofanacellulardermalmatrix(ADM)andweresubmergedintotheconditionculturemediumaddedwith25ng/mlofthekeratinocytegrowthfactor(KGF).However,inthecontrolgroup,noKGFwasadded.After24hours,theADMwasmoveduptotheair—fluidsurface,andth