模拟皮肤发育构建含附件组织工程皮肤的初步研究

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：吴吁签字日期：刈弓年f月矽日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可

2、以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：关舒导师签名(手写)：2八签字日期：仞l弓年歹月≥9日签字日期：刀f弓年厂月矽日摘要目的：应用刀片刮取法及酶消化法获取胎鼠和小鼠表皮细胞和成纤维细胞，对获得的表皮细胞和成纤维细胞进行培养、鉴定

3、，并应用获得的表皮细胞作为种子细胞，PGA作为支架，初步构建含附件组织工程皮肤，为胎鼠表皮细胞的多向分化潜能提供良好的实验模型，并力求获得生物学性能更完整的组织工程皮肤，为临床应用提供更理想的生物修复材料。方法：对刀片刮取法及酶消化法获取的胎鼠和小鼠表皮细胞，以角质细胞无血清培养基(K．SFM)进行培养，观察细胞生长状况及克隆形成情况，选择Pan．CK多克隆抗体对细胞进行鉴定；对酶消化法获取的胎鼠和小鼠成纤维细胞，以DMEM进行培养，观察细胞生长状况及克隆形成情况，选择vimentin单克隆抗体对细胞进行鉴定；应用培养的表皮细胞、成纤维细胞及PGA支

4、架初步构建组织工程皮肤，观察形成皮肤及附件的情况。结果：1．不同发育阶段胎鼠和小鼠皮肤组织结构观察揭示了皮肤附件的生长发育规律，即在胚胎14．5天(embryo14．5天，E14．5天)时，虽然表皮细胞仅为1．2层，但皮肤附件发育已经开始，E16．5天时是皮肤附件发育最为旺盛的时期，E18．5天皮肤附件发育基本完成，生后7天(postnatal7,P7)时皮肤附件发育成熟。2．应用刀片刮取法能成功获取E14．5天的胎鼠表皮细胞，并能建立稳定的表皮细胞系。3应用酶消化法能分别获取E16．5天，E18．5天，生后7天的胎鼠和小鼠表皮细胞及成纤维细胞，并能

5、建立稳定的细胞系。4．经培养出的E14．5天胎鼠表皮细胞、成纤维细胞和PGA支架构建的组织工程皮肤，组织切片可见人造皮肤大体形态比较接近正常皮肤，表皮分层分化较完善，可见基底层、棘细胞层及角化层。结论：1．通过对不同发育阶段胎鼠和小鼠皮肤组织结构的观察，我们初步掌握了皮肤附件的生长发育规律。2．刀片刮取法是一种获取E14．5天的胎鼠表皮细胞较好的方法，可以得到数量较多，细胞活力较好的E14．5天的胎鼠表皮干细胞。II摘要3．消化法是一种获得E16．5天，E18．5天，生后7天的胎鼠和小鼠表皮细胞及成纤维细胞的稳定的细胞培养技术。4．用E14．5天胎鼠

6、表皮细胞、成纤维细胞和PGA支架构建的组织工程皮肤，表皮结构较好，基本形态比较接近正常皮肤。本实验以PGA为支架，通过胚胎小鼠来提供表皮细胞和真皮成纤维细胞，从而首次构建含附件的组织工程皮肤的模型，为以后构建真正意义上的含附件的组织工程皮肤提供了可靠的理论和实验依据。关键词：组织工程皮肤；皮肤附件；表皮细胞；PGAIIIAbstractABSTRACTObjective：Applicationbladescrapingmethodandenzymedigestionmethodtoobtainkeratinocyte(KC)andfibercells

7、offetalratand．Cultureandidentificationofthesecells，andapplicationstheKCasseedcells，PGAasastand，toconstructtissue—engineeredskinwithskinappendages，toprovideagoodexperimentalmodelforfetalratKCpluripotent，andseekstoobtainamorecompletebiologicalpropertiesoftissue．engineeredskinprov

8、ideabetterbiologicalrepairmaterialsforclinicalapplicat