以脱细胞真皮混合构建组织工程皮肤

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1、以脱细胞真皮混合构建组织工程皮肤硕士生姓名：指导教师：指导小组：专业名称：陈灿王志军教授张晨教授整形外科学摘要目的：在以往组织工程皮肤的研究中，皮肤替代物的构建均是分别接种成纤维细胞和表皮细胞，存在的问题是表皮细胞在脱细胞真皮上不易粘附，且表皮与真皮间连接不紧密，难以运用到临床。有研究证实，成纤维细胞分泌的生长因子及细胞外基质成分可促进表皮细胞的迁移、增殖及分化。本实验以此为依据，尝试将表皮细胞与成纤维细胞混合接种，探讨该方法在体外构建复合皮的可行性。方法：取人包皮分别进行成纤维细胞和表皮角质细胞的分离培养。在脱细胞真皮的真皮

2、面接种成纤维细胞7d后，实验分二组进行。实验组：将表皮细胞按5×105／cm2与成纤维细胞O．2×l05／cm2混合后接种于表皮面，培养液用K．SFM与成纤维细胞上清的l：l混合液。对照组：仅接种表皮细胞5×105／cm2，培养液用K．SFM。培养1、3周后取材观察其形态变化，并对培养3周的复合皮行免疫组化鉴定及透射电镜观察。结果：采用二步酶消化法分离细胞，收集的表皮细胞及成纤维细胞数量多，且细胞活力好。取材1周的标本，实验组于脱细胞真皮上可见融合的表皮细胞，排列紧密；对照组只见散在的表皮细胞。培养3周后，实验组可见表皮层连续

3、，细胞层数3．4层，与真皮连接紧密，有表皮脚形成；对照组表皮层仅1．2层，且与真皮分离。实验组Laminin(++)提示基底膜形成充分，并经透射电镜也可观察到完整的基底膜。结论：经打孔处理后的脱细胞真皮可用于组织工程皮肤的构建。将表皮细胞与少量成纤维细胞混合接种，可促进表皮细胞在脱细胞真皮上粘附增殖，并有助于基底膜充分形成。按此种模式构建的组织工程皮肤经HE、免疫组化、电镜均证实接近正常皮肤关键词：混合接种脱细胞真皮组织组织工程皮肤基底膜ConstructionoftissueengineeringskinonADMbymlX

4、—seelllng●'●Masterdegreecandidate：ChenCanSupervisor：ProfessorWangZhi—junVice—supervisor：ZhangChengMajor：PlasticSurgeryAbstractObjective：Inthepastresearchabouttissueengineeringskin，fibroblastsandepidermalcellswereallseededseparately．Thereisaproblemthatepidermalcellsd

5、idn’teasilyadheretoADM．what’Smore，itcan’tusedinclinicalworkbecauseepidermisdidn’tsticktodermistightly．Accordingtosomeresearch，growthfactorsandextracellularmatrixsecretedbyfibroblastscanpromotetomigration、proliferationanddifferentiation．Theaimofthisexperimentistoinve

6、stigatethefeasibilityofmix—seedingconstructingtissueengineeringskininvitro．Methods：Fibroblastsandepidermalcellswereculturedseperatedlyfromhumanforeskin．Fibroblastswereseededonthedermalsurfaceofacellulardermalmatrix(ADM)．7dayslater，epidermalcells(5×105／cm2)weremixedw

7、ithfibroblasts(0．2x103)andthenseededonepidermalsurfaceofADM．TheculturemediumwasmixedliquorcontaininghalfofK—SFMandanotherhalfoftheculturesupernatantsoffibroblasts．Butinthecontrolgroup，onlyepidermalcells(5×105／cm2)wereseededandculturedwithK—SFM．Aftercompositeskinhave

8、beenculturedfor，1weekand3week，sampleswereharvestedrespectivelytoobservethemorphologicalalteration．Constructed3-weekcompositeskinwasidentif