酪丝亮肽对人肝癌bel7402细胞的抑制作用及对nk细胞杀伤活性的影响论文

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1、酪丝亮肽对人肝癌BEL7402细胞的抑制作用及对NK细胞杀伤活性的影响论文【摘要】［目的］研究三肽化合物酪丝亮肽（tyroserleutide，YSL）对人肝癌BEL7402裸鼠移植瘤的抑制作用及对自然杀伤细胞（NK细胞）杀伤活性的影响。［方法］建立人肝癌BEL7402裸鼠移植瘤模型，观察YSL对肿瘤生长的抑制作用；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测YSL对正常小鼠及人肝癌BEL7402荷瘤鼠的NK细胞杀伤活性的影响。［结果］YSL160μg/（kg·d）能抑制BEL7402的生长，肿瘤抑制率为72.23%，且能增强BEL7

2、402荷瘤裸鼠及正常小鼠NK细胞杀伤活性，与生理盐水组相比均具有显著性差异（P0.05）。［结论］YSL对人肝癌BEL7402裸鼠移植瘤有抑制作用，并具有增强正常及荷瘤小鼠NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的作用。【关键词】酪氨酸丝氨酸亮氨酸小鼠裸肿瘤实验性肝肿瘤杀伤细胞天然InhibitiveEffectofTripeptideTyroserleutid（YSL）onHumanHepatocellularCarcinomaBEL7402cellsandItsEffectontheActivityofNKCellAbstract:［P

3、urpose］Toinvestigatetheinhibitiveeffectoftripeptidetyroserleutide（YSL）onhumanhepatocellularcarcinomaBEL7402transplantedtumorinnudemiceanditseffectontheactivityofnaturalkillercells(NKcell).［Methods］HumanhepatocellularcarcinomaBEL7402transplantedtumormodelinnudemiceo

4、rgroalmiceandinnudemicetransplantedaBEL7402ethylthiazolyltetrazolium(MTT)colorimetricassay.［Results］YSL160μg/(kg·d)couldinhibitthegroorBEL7402innudemice,orinhibitionrate72.23%,andcouldenhancetheactivityofNKcellinnaturalmiceandinnudemicetransplantedaBEL7402,aBEL7402

5、transplantedtumor,andcanenhancetheactivityofNKcell.Keyice,nude;neoplasms,experimental;liverneoplasms;killercells,natural酪丝亮肽是我国自主研发的小分子多肽化合物，由三个氨基酸组成.freel1640培养液购自GIBCO试剂公司，胎牛血清购自Hyclone试剂公司，MTT购自SIGMA试剂公司。1.2细胞株YAC1细胞株，天津医科大学免疫教研室保存。1.3实验动物健康BALB/c小鼠（CLA即清洁动物级），雄

6、性，6~8周龄，体重18g~22g，购自军事医学科学院实验动物中心。健康BALB/c(nu/nu)裸鼠（SPF即无特定病原体动物级），雄性，4~5周龄，体重18g~22g，与荷人肝癌BEL7402裸鼠均购自中国医学科学院肿瘤研究所动物中心。于独立换气的无特定病原体的层流柜中饲养，所用饲料、垫料、饮用水均为无菌处理，严格按照NIH标准（安全操作号：A38731）进行。1.4YSL对正常小鼠NK细胞杀伤活性的影响3将30只健康BALB/c小鼠随机分为YSL不同剂量组160μg/(kg·d)、80μg/(kg·d)、生理盐水组，每

7、组10只，连续腹腔注射给药，每日1次，连续给药28d。于给药结束后次日处死小鼠，无菌条件下取脾脏，常规制备脾细胞悬液，以PRMI1640液调整细胞浓度为4×106个/ml，将已达到对数生长期的YAC1细胞制成1×105/ml4，于96孔细胞培养板中加入各组小鼠脾细胞悬液100μl/孔和细胞培养基100μl/孔，作为效应细胞孔，设3个复孔；加YAC1细胞100μl/孔和培养基100μl/孔，作为靶细胞孔，设2个复孔；加YAC1细胞100μl/孔和各组小鼠脾细胞悬液100μl/孔，作为实验孔，设3个复孔。将加好样品的96孔培养板

8、，置于37℃、5%二氧化碳孵箱中培养4h后用MTT法检测NK细胞杀伤活性。按以下公式计算NK细胞杀伤率：NK细胞杀伤率(%)=1-(实验细胞孔OD值-效应细胞孔OD值)/靶细胞孔OD值×100%。1.5YSL对人肝癌BEL7402裸鼠移植瘤的影响5选取肿瘤直径大于1cm，生长状态良好的荷人