原癌基因pik3ca在宫颈癌组织中的表达及意义

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1、原癌基因PIK3CA在宫颈癌组织中的表达及意义：王洪艳崔竹梅刘湘萍隋爱华杨堃孙显路【摘要】目的研究原癌基因PIK3CA在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法用RTPCR方法检测PIK3CAmRNA在15例正常宫颈组织和30例宫颈癌组织中的表达,免疫组化方法检测其蛋白在50例宫颈癌前病变组织及20例宫颈癌组织中的表达情况。结果从宫颈上皮内瘤样病变(CIN)到宫颈癌的发展过程中，PIK3CA的蛋白表达产物PI3Kp110a蛋白表达水平逐渐增加(Hc=9.968,P<0.05)；PIK3CAmRNA在宫颈癌组织和

2、正常宫颈组织中的表达差异有显著性(t=2.672,P<0.05)。结论PIK3CA基因改变与宫颈癌的发生发展有关，宫颈癌的发展过程伴随着PI3Kp110a蛋白的表达异常。【关键词】宫颈肿瘤；宫颈上皮内瘤样病变；原癌基因蛋白质PIK3CA；免疫组织化学　　［ABSTRACT］ObjectiveToexploretheexpressionofprotooncogenePIK3CAincervicalcanceranditssignificance.MethodsTheexpressionsofPIK3CAm

3、RNAinnormalcervicaltissue(15cases)andcervicalcancertissue(30cases)munochemistry.ResultsTheexpressionsofPIK3CAmRNAalcervixandcervicalcancer(t=2.672,P<0.05).IntheprocessfromCINtocervicalcancer,thePIK3CAproteinproducts(PI3Kandp110a)increaseddramatically(Hc=9

4、.968,P<0.05).ConclusionThechangesofPIK3CAgeneisrelatedtothemorbidityofcervicalcancer,theprocessofthecancerisfollos;Cervicalintraepithelialneoplasia;ProtooncogeneproteinsPIK3CA;Immunohistochemistry宫颈癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，流行病学研究显示，宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒（HPV）感染关系密切。生育期

5、妇女中HPV感染非常普遍，然而只有一小部分妇女发生宫颈癌,因此,除了HPV感染以外宫颈癌的发生还存在其他的必要因素。与其他肿瘤一样，宫颈癌的发生也被认为是与癌基因激活或抑癌基因失活有关的多步骤的发展过程[1]。PIK3CA，编码磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）的p110a亚基，已被证实是一种癌基因，人类多种恶性肿瘤中都存在该基因的突变。本实验应用免疫组化方法和RTPCR方法,检测PIK3CA在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达变化,以探讨其在宫颈癌发生与发展中的作用。现将结果报告如下。　　1材料与方法　

6、　1.1标本及其宫颈鳞癌组织标本30例,病人年龄28～49岁，平均39.13岁，术前均未进行放疗或化疗，其中Ⅰ期22例，Ⅱ期8例；高分化10例，中分化12例，低分化8例。所有标本均取自青岛大学医学院附属医院妇科住院的病人。标本取得后一部分迅速置于-80℃超低温冰箱保存备用,其余送病理科进行病理学诊断,其中20例宫颈鳞癌组织标本（高分化6例，中分化9例，低分化5例）同时进行石蜡包埋，制成组织切片备用。正常对照标本15例,均为子宫肌瘤手术切除的正常宫颈组织。另外,对本院病理科2004～2006年间50例石蜡包埋的宫

7、颈组织切片进行回顾性分析，其中正常宫颈切片15例，宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ者10例，CINⅡⅢ者25例。　　1.2PIK3CA蛋白表达产物PI3Kp110a蛋白检测采用免疫组织化学PV6000二步法。试剂兔抗人PI3Kinasep110alpha抗体购自CellSignalingTechnology公司，工作浓度为1∶25；通用型PV6000二步法免疫组化检测试剂盒购自中杉金桥公司。组织切片脱蜡处理后水化，灭酶，然后置于0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中,微波炉加热至95℃共10～15

8、min进行抗原修复,按照试剂盒说明书依次滴加一抗、通用型二抗,最后切片经梯度乙醇脱水,干燥,二甲苯透明,中性树胶封固,显微镜观察结果。结果判断：用已知的阳性对照片作阳性对照，以PBS液代替一抗作阴性对照。PI3Kp110a蛋白阳性染色位于胞浆。高倍镜下随机选4个视野，结合阳性细胞百分率和染色强度进行半定量分级，然后取平均值。染色强度判定标准如下：胞浆内无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色