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1、时间分辨荧光免疫技术检测乙肝血清标志物临床应用评价【摘要】目的对时间分辨荧光免疫技术(TRFIA)定量检测乙型肝炎病毒(HBV)五个血清学标志物进行临床评价。方法用TRFIA法和酶免法(EIA)对定值样品和355份临床标本同时测定，对两种方法的结果进行比较分析。结果TRFIA检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb的灵敏度分别为0．2ng/ml、10mIU/ml、0．05Ncu/ml、2Ncu/ml和0．2Ncu/ml;对355份临床血清测定,除HBeAg外,其余4个指标检测阳性率均大于EIA，两个高浓度HBsAg血清EIA法阴性，但TRFIA为阳
2、性。结论TRFIA较EIA更为敏感;TRFIA在一定程度上可克服EIA法中的高剂量钩状效应。�【关键词】时间分辨荧光免疫技术;免疫酶技术;乙型肝炎血清标志物�时间分辨荧光免疫分析(time-resolvedfluorescenceimmunoassay，TRFIA)是用镧系元素Eu��3+�(铕)螯合物作为示踪物标记抗原或抗体,在免疫反应完成后加入特殊的增强液,将Eu��3+�4从标记抗原或抗体上解离下来并与增强液中的组分形成新的具有强烈荧光的螯合物,用特定的仪器测定荧光强度,从而判断反应体系中被测物浓度TRFIA具有灵敏度高,特异性强,操作简便,示踪物稳定,可进行定量
3、分析,无环境污染等优点。乙肝病毒感染是常见感染性疾病之一,临床常用酶免技术检测乙肝病毒血清学标志物,诊断HBV感染,由于钩状效应和敏感性的原因，常造成HBV感染的漏诊。本文对TRFIA定量检测乙肝病毒五个血清标志物进行临床评价为实验室方法学选择提供参考,现介绍如下。�1材料和方法�1．1标本355份HBV感染者血清来自本院门诊及住院患者。�1．2试剂定量检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb试剂盒:上海新波生物技术有限公司产品，批号20030526。EIA试剂盒:北京金豪生物技术有限公司产品,批号20070512。乙肝病毒血清标志物定值质控样品:
4、卫生部临床检验中心,批号0703。�1．3仪器时间分辨荧光免疫分析仪:Anytest2000。酶标仪:EL2800。�1．4方法TRFIA/EIA试剂盒定量/定性检测乙肝病毒血清标志物,均严格按各自说明书要求进行质控样品和临床标本检测。�1．5结果判断TRFIA法:HBsAg≥0．5ng/ml，HBsAb≥10mIU/ml，HBeAg≥0．03Ncu/ml，HBeAb≥1．54Ncu/ml，HBcAb≥1．0NCU/ml为阳性。�2结果�2．1TRFIA敏感性对HBsAg0．2ng/ml、HBsAb10mIU/ml、HBeAg0．5Ncu/ml、HBeAb2Ncu/ml
5、和HBcAb0．2Ncu/ml质控样品TRFIA均可检出。TRFIA敏感性见表1。�2．2TRFIA检测HBsAg范围HBsAg质控样品0．2、2、5ng/ml和高值(>10000ng/ml)TRFIA均可检出。�2．3TRFIA检测HBsAg的重复性用TRFIA对1ng/ml和HBsAg定值质控血清重复20次测定,CV值为4．35%。�2．4TRFIA法和EIA法测定355份临床血清标本结果见表2。�3讨论�3．1EIA是目前临床检测HBV血清标志物普遍采用的方法,由于各试剂生产厂家所采用的包被基因片段的差异、操作步骤的有所不同(一步法、二步法)及操作时差、污染等因素
6、的影响,致使检测结果有所出入[1],传统方法(EIA)对乙肝两对半血清标志物测定是定性法,只能判断其阴阳性,无法得知其真正的浓度,对临床诊断和治疗带来许多不便。而HBV血清标志物定量检测能较为准确地反映其血清中的含量,可以间接反映体内HBV复制活跃程度,对临床药物疗效评价具有重要意义[2]。�
43．2TRFIA法检测乙肝病毒五项血清学标志物的灵敏度均高于EIA法,并具有较好的重复性,可检出>10000ng/ml的HBsAg，提示对弱阳性和高浓度HBsAg标本，TRFIA检出率高于EIA。�3．3检测结果显示,两种方法HBeAg结果一致率较好,其余4个指标TRFIA检测
7、的阳性率均大于EIA，TRFIA检测较EIA检测更敏感,可减少低浓度的HBsAg、HBeAg感染患者的漏诊[3]。�3．4TRFIA对HBsAg>10000ng/ml可检出,对296份临床血清检测时,2份HBsAg高值血清,在1∶100稀释后EIA才出现阳性,而TRFIA检测原血清即为阳性。结果表明,与EIA比较,TRFIA不易出现高剂量HBsAg的假阴性。�参考文献�［1］魏来,陶其敏.努力规范肝脏疾病的免疫学诊断.中华检验医学杂志，2003，26(2):69-71.�［2］张继东．乙型肝炎表面抗原定量检测临床意义的探讨.标记免疫分析与
