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1、1个新的胰腺癌相关基因的筛选和初步鉴定360第29卷第4期第三军医大学Vo1.29,No.42007年2月ACTAACADEMIAEMEDICINAEMILITARISTERTIAEFeb.2007论蔫1个新的胰腺癌相关基因的筛选和初步鉴定文章编号:1000-5404(2007)04—0360—04蒋业贵',李兆申,王宇明',刘同华(第三军医大学:西南医院全军感染病研究所,重庆4000383新桥医院药剂科,重庆400037;第二军医大学长海医院消化内科,上海200433)提要:目的筛选和鉴定胰腺癌相关基因.方法提取胰腺癌和癌旁正常胰腺组织中的RNA和mRNA
2、,应用抑制消减杂交技术(SSH)构建消减cDNA文库.采用随机数字表法挑选有插入片段的阳性克隆进行测序及同源性分析.应用RT—PCR和Northernblot检测新基因在12例胰腺癌和癌旁正常胰腺组织以及4种胰腺癌细胞株(PaTu8988,SW1990,Bx.Pc一3,AsPC-1)中的表达情况.结果随机挑取50个直径>1am的白色克隆进行PCR扩增分析,其中47个克隆有插入片段,克隆阳性率为94%.对47个有插入片段的阳性克隆进行测序,得到42个可用序列.同源性分析发现41个为已知基因,1个为无任何功能线索的未知基因,可能代表了新基因.RT—PCR显
3、示新基因在12例胰腺癌组织和4种胰腺癌细胞株中均表达,而在正常胰腺组织中未见表达.Northernblot分析得到相同的结果.结论应用SSH技术成功构建了人胰腺癌抑制消减cDNA文库,并筛选出1条新的胰腺癌相关基因.新基因与胰腺癌的发生,发展密切相关,可作为胰腺癌诊断和基因治疗的分子靶标.关键词:胰腺癌;抑制消减杂交;cDNA文库;逆转录聚合酶链反应中图法分类号:ft319;R394-33;R735.9文献标识码:AScreeningandidentificationofanovelgene-relatedhumanpancreaticcancerJIANG
4、Ye.gui',LIZhao.shen,WANGYu—ming',LIUTong.hua(InstituteofInfectiousDiseases,SouthwestHospital,Chongqing400038,.DepartmentofPharmacy,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,DepartmentofGas.troenterology,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai2
5、00433,China)Abstract:0bjectiveToscreenandidentifyanovelgene-relatedhumanpancreaticcancer.MethodsTotalRNAandmRNAwereisolatedfromhumanpancreaticcancer(astester)andnormalparacancerouspan-creastissues(asdriver),respectively.ThesuppressivesubtractivecDNAlibrarywassetupusingsuppressivesu
6、btractivehybridization(SSH).Thepositiveclonesrandomlyselectedinthelibraryweresequencedandana—lyzedforhomologywithBLAST.Theexpressionofthenovelgenein12specimensofpancreaticcancerandnor?maltumor—surroundingpancreastissuesand4pancreaticcancercelllines(PaTu8988,SW1990,BxPC一3,As—PC一1)we
7、redetectedbyRT—PCRandNorthernblotanalysis.ResultsRandomanalysisof50whitecloneswithPCRamplificationshowedthat47clonescontainedinsertedfragments.Thepositiveratewas94%.The47positivecloneswereselectedforfurthersequencingand42usablesequenceswereobtained.AfterBLASTh0一mologyanalysis,41oft
8、hemwerefoundtobeknowngenes
