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1、广枣总黄酮对CVB_3病毒引起细胞凋亡的影响第17卷第3期VoI.17No.3中莲药导最GuidingJournalofTraditionalChineseMedicineandPharmacy2011年3月March.2011广枣总黄酮对CVB3病毒引起细胞凋亡的影响刘爽(内蒙古医学院第二附属医院,内蒙古呼和浩特010000)『摘要1目的:建立病毒性心肌炎的体外模型,用新的化学方法提取到含量较高的广枣总黄酮,研究广枣总黄酮抗病毒的效果方法:化学法提取广枣总黄酮,高效液相法测定其含量.培养HeLa~胞和乳鼠心肌细胞,在HeLa~胞和心肌
2、细胞水平上对柯萨奇B病毒进行毒力滴定,并测定广枣总黄酮的药物毒性,建立体外病毒性心肌炎模型,通过细胞病变抑制实验测定广枣总黄酮体外抗柯萨奇病毒能力.采用Hoechst33258荧光单染观察染色质凝聚,观察病毒性心肌炎发病过程中心肌细胞是否存在凋亡,以及运用流式细胞仪检测广枣总黄酮是否抑制细胞凋亡.统计学方法采用T检验.结果:成功建立体外病毒性心肌炎的模型,广枣总黄酮在HeLa细胞和乳鼠心肌细胞实验中可有效抑制CVB3病毒引起的细胞病变数(P<O.05),对病毒繁殖及细胞凋亡有抑制作用.结论:成功建立体外细胞模型,通过体外实验证实提
3、取的广枣总黄酮对心肌细胞有保护作用,通过凋亡相关实验证实病毒性心肌炎发病过程中有心肌细胞凋亡,且广枣总黄酮能抑制心肌细胞凋亡作用.『关键词】广枣总黄酮;病毒性心肌炎;CVB3;细胞凋亡『中图分类号1R285.5[文献标识码】A[文章编号】1672—951X(201l】03—0087—03TheeffectofTFCtocellapoptosisinducedbyCVB3virusABSTRACTLiuShuangsecondaffiliatedhospitalofinnermongoliamedicalcollege,hohhotOLO
4、OOO)[Objectives】Toestablishmodelofviralmyocarditisinvitro,TodistillTFC(Totalflavonesofchoerospondiasaxillariesfructus1withanewmethod,Totesttheanti—viraleffectofTFC.Method:UsingchemicalmeanstodistillTFCandtestcontentwithHPLCmethod.TCID50ofCVB(coxsackievirusB1)wasdetermine
5、dwithReed—Muenchmethod,theanti—viraleffectofTFCinvitrowasvalidatedthroughcytopathiceffectexperiment.CardiomyocyteApoptosiswasperformedbyusingHoechst33258,Flowcytometry.Result:Theviralmyocarditismodelinvitrowassuccessfullyestablished,TFCcaninhibitCPE(P<0.05)inCPEexperi
6、ment.Virus-reproducinginhibitingexperimentshowsTFCcaneffectivelyinhibitcoxsackievirus,Loga—rithmValueraisemorethanoneunit,Apoptosisrateofcellswasreduced.Conclusion:weestablishedviralmycarditismud—elinvitroandprovedTFCisaneffectiveantiviraldrug.TFCcanreducetherateofapopto
7、sisinducedbyCVB3.[KeywordJTFC;VMC;CVB3;Apoptosis广枣为蒙医常用药材,主要分布于华中,华南各省f区)及贵州,云南,福建,浙江等省区,是漆树科南酸枣属植物南皂苷具有专屙陛强,显色灵敏的优点,明显优于传统显色剂.3.2溶剂选择对照品与供试品的溶解性试验结果显示,二者在70%乙醇中易溶,溶解度优于甲醇,经试验70%乙醇对比色测定无干扰,故选择70%乙醇作为供试品与对照品的溶剂.3.3提取方法比较对皂苷的提取方法进行了比较试验,结果显示超声与回流提取效果基本一致,而超声具有操作简便快速的优点,故选择
8、了超声处理的方法;对超声时间考察结果显示,超声30min已提取完全,故确定超声时间为30min.参考文献[1】国家中医药管理局.中华本草第8册【M】.上海:上海科学技术出版社,2000:252【2】康阿龙,
