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《乌拉尔甘草不同外植体来源愈伤组织生长状况和含糖量的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、乌拉尔甘草不同外植体来源愈伤组织生长状况和含糖量的研究2007.5作物杂志Crops乌拉尔甘草不同外植体来源愈伤组织生长状况和含糖量的研究术曹君迈陈彦云任贤刘建利赵海燕张嫱摘要以野生乌拉尔甘草的不同营养器官为外植体,探讨了不同培养条件下不同外植体愈伤组织生长动态,相对生长量,糖分含量的变化情况.结果表明,不同外植体愈伤组织生长动态均呈S形曲线,最佳继代培养时间为24d左右.在黑暗条件下,根段愈伤组织相对生长量最高,达577.29%,在光照条件下根茎芽愈伤组织还原糖和总糖含量最高,分别为0.74%和1.553%.关键词乌拉尔甘草;愈伤组织;培养条件;生长状况;糖分含量甘草(Gl
2、ycyrrhizauralensis)是豆科甘草属多年生草本植物,主要分布在西北,东北,华北等省区沙地和沙质灰钙土上….我国是世界上的甘草生产大国,出口到30多个国家和地区,国内年需求量3万t左右,年出口量约为5万tJ.近年来,由于滥采乱挖使我国甘草产地的生态环境受到了严重破坏,目前野生甘草的蕴藏量仅为l5亿kg,是建国前的50%_3J.宁夏是我国甘草资源重点分布区和主产区之一,主要以野生乌拉尔甘草为主,其干燥根,根茎入药,具有抗溃疡,抗过敏,镇咳祛痰,清热解毒,缓和药性和抗HIV等功效,5j.人工栽培从播种到收获,一般需要3～4年且不易出苗j.面对野生资源短缺,人工种植出苗
3、率低,费时费工,栽培生产周期长,市场需求加大的局面,利用植物组织培养技术生产次生代谢产物将是行之有效的途径之一.甘草植物组织培养的研究已有报道j,但主要集中在不同激素配比对愈伤组织诱导,甘草酸含量分析以及毛状根培养体系的建立上.直接以多年生野生乌拉尔甘草成熟器官为外植体,研究不同培养条件下不同来源愈伤组织的生长动态,糖分含量,含水量的差异,以及作者简介:曹君迈,西北第二民族学院生命科学系,750021,宁夏银J陈彦云,宁夏大学生命科学学院,750021,宁夏银川任贤,刘建利,赵海燕(通讯作者),张嫱,通讯地址同第1作者基金项目:宁夏自然基金项目(编号:NZ0688)收稿日期:
4、2007—05—09;修回日期:2007—07—10l6愈伤组织鲜重测定方法等,目前还未见有文献报道.因此,笔者对这几方面开展了相关的研究,以便为甘草高产细胞系的建立和工业化生产次生代谢产物奠定理论和技术基础.1材料与方法1.1材料试验材料为野外多年生乌拉尔甘草(G.uralensisFisch).试验试剂均为分析纯,植物激素购于SIGMA公司.1.2方法1.2.1材料的消毒与接种取根段,根茎芽作为接种材料,用洗洁精漂洗l遍,再用自来水冲洗约30min之后,用75%酒精杀菌l5～30s,用无菌水冲洗3遍,再用0.1%的升汞消毒5～8min,无菌水冲洗3～5遍,在头孢他定溶液中
5、浸泡20min后,置于无菌滤纸上吸干水分,切成长度为0.5cm左右的小段,接种于愈伤组织诱导培养基MS+BA2mg/L+2,4-D0.5mg/L+蔗糖30g/L,pH6.0,琼脂6.5g/L.每瓶接3块外植体.培养30d,统计愈伤组织诱导率,50d时统计褐化率.1.2.2愈伤组织鲜重测量方法接种前对盛有培养基的瓶先称重,记录其重量,然后进行接种.留l5瓶不接种的培养基作对照,以便校正培养时水分损失程度.接种时,愈伤组织放在消过毒的天平上,每瓶接种lg,每处理接种l5瓶,称量并记录8d,16d,24d,32d和40d的愈伤组织重量.1.2.3愈伤组织干重测量方法培养30d的愈伤
6、组织,称取鲜重.105oC烘30min,60oC烘12h,至恒重即为干物重.1.2.4还原糖测定培养30d的愈伤组织,采用蒽酮测定法进行还原糖,总糖滴定.1.2.5培养条件培养温度为22℃.光照培养时的光照强度为20001)【,光照时间12h/d.1.2.6结果统计方法愈伤诱导率(%)=愈伤块数/接种个数×100%作物杂志Crops2O07.5褐化率(%)=褐化块数/接种个数×100%愈伤组织鲜重(g)=限定生长天数的总重(g)一接种前瓶重(g)+相同培养天数的对照水分损失重量(g)相对生长量(%)=(限定培养天数愈伤组织鲜重一接种愈伤组织鲜重)/接种愈伤组织鲜重×100%愈
7、伤组织含水量(%)=(鲜重一干重)/鲜雷×100%2结果与分析2.1不同外植体不同培养条件愈伤组织诱导表1数据表明,黑暗条件下愈伤组织诱导率略优于光照条件.光照促进了愈伤组织褐化,特别是根段培养50d时褐化率达100%,不同外植体在黑暗条件下培养均有利于褐化率的降低和愈伤组织诱导.表1不同外植体愈伤组织诱导结果外植体袭生长情况2.2不同来源愈伤组织生长态势研究2.2.1不同培养条件对愈伤组织生长的影响表2数据表明,不同培养条件下根段和根茎芽愈伤组织从培养的1～24d重量在不断增加,24～40d重量开始降
