急性髓细胞白血病中hedgehog-gli通路活化及rapamycin对其调节作用的研究

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1、中国医科大学博士学位论文急性髓细胞白血病中Hedgehog--gli通路活化及rapamycin对其调节作用的研究姓名：潘登申请学位级别：博士专业：血液内科指导教师：李艳201104 ·中文论著摘要·断��，��，��和�����氲ザ朗褂枚訟�的作用的区别凋亡，��瓒霞粱钒桶分荒苁筴��赴�蛲觯珿���梢韵碌鞲琇细胞中��中的活性；��阻断剂�����碌鰽�中��幕钚裕煌�笔褂胷�������有可能成为治理��男乱��溆雛����有协同作用。关键词：����／��琍��疉�／��，��珿����蛲觯瑀����� ���������．�����������

2、�������������������������������������������������甇���琻����������������������������������．���������������������������������篐����疓�，��／��痬����珿���瑀��������� ·英文缩略语·��������������������������� 前言重要的意义。� �����判断其纯度。反转试剂盒按说明书反转和扩增，定量用�����觳夥�����Ｓ肁�的��表达作为内参。�������������一一一�� 五、免疫荧光

3、兔抗人��嗫寺】固骞鹤許����，��标记的羊抗兔二抗购自中山金桥。细胞甩片先用�ザ嗑奂兹┦椅鹿潭��种樱�缓笥煤�％的牛血清白蛋白封闭�分钟，然后一抗室温一小时，二抗室温敷育一小时，��染色��，荧光显微镜观测拍照。兔抗人多克隆��和��，��昙堑难蚩雇枚�咕�鹤詓��蛋白上样量��⒖恕��ぷDぁ＞�JW#琱�����；�����。二抗浓度：������发七、细胞甩片及形态观察�加入����工作液，��培养�，分别测������，相减得到调整后��疨����，�� 先检测数据是否符合正态分布，然后进行�煅椋琾�．�判定为阳性。 三日禾四种培养中的细胞系

4、见图，不同浓度的���作用于四种细胞，��猯方法检测��的变化，结果显示，��和����的表达明显下降。�� 无血清�����嘌��∈保�ζ�驢�旧ê笈恼铡Ｗ螅篋��挥遥篏���� 图�煌�ǘ菺���訟�细胞的作用�煌珹�细胞分别用不同浓度的 ���＃��∞靠��啪����．�℃��� ��位�吼�����������������的表达�街諥�细胞分别使用���无血清培养�和�小时，提取��，反转，进行��和���� ���瓒蟝��訦��细胞有毒性作用��的表达。对照组选用空白的����扇胖���∈保琖�����检测胞毒性。期蝴蝴麓猢—蛹黪镧嘲期黪���

5、阂籧����有�≯墨∽装� ����骻��鞍妆泶锏谋浠�未转染，转染空白质粒，转染��的细胞均�％血清培养�小时之后，提取总蛋白，��ǖ鞍锥�浚�靠咨涎��长的影响�煌���パG迮嘌��∈焙蠼�蠾�一�治�������颊� ��鞍自贙��虷���赴�械谋泶�细胞甩片�ザ嗑奂兹┕潭ǎ瑂� � ���� 营�重��，环巴胺，环巴胺对照药�����无血清培养�小时，收集细胞提取蛋� 与多种实体瘤相关。近年来，陆续有该通路在血液肿瘤中活化的报道，包括白血�����������过程。通路起始于细胞自分泌或旁分泌的多肽�磁涮�，进行临床试验。最早发现的该通路得阻断剂

6、是环巴胺，它是一种天然的藜芦碱类物尽管先前已有假说推测阻断��赡鼙茸瓒蟬�有更广泛的应用，但由于缺少特可能源于其他肿瘤相关的通路的失调。� ����，��������窒赴��さ幕��肋�鹋�，些下游基因进而导致了细胞的凋亡还需要进一步研究。� 一、细胞系与细胞培养���三、��崛。�炕�蛂�六、质粒的转化，提取，转染�������岫觥ｐ�筇栏司鶦��法转化质粒。肉汤培养基扩增细菌。质粒提取试帮盒提取质粒��鑖�������柿�和转染韵《、幽的比钠为��七、萤光素酶报告基因 ������的影响都在�小时之后才明显出现。口��。■���� ��������

7、����对��赴�術���的表达的影响�街諥�细胞使用�����无血清处理至�小时，分别收集�������∈毕赴���縋�检测��和����的表达，��魑D诓�■������ ������对��赴�術���的表达的影响�街諥�细胞使用���％ �緀��检测��和����的表达，��魑D诓��蛋白的影响我们检测了三种阻断剂对�一�细胞中����蛋白表达的影响，结果显示与蛋自的变化要先于��的变化，但变化趋势与之相同。�。石�∞△�●一；黔� 的表达，���魑D诓��∞�∞�．图�煌��纷瓒霞炼訦���赴鹓��鞍椎挠跋��一�细胞分别使用��，的表达，���

8、魑D诓�为了进一步验证这三种通路阻断剂对� ���蓉蛊渤伽湖种啪���对�一�细