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1、基质金属蛋白酶-9参与吸烟所致气道黏液高分泌的信号转导通路环境与健康杂志2007年7月第24卷第7期JEnvironHealth,July2007,Vo1.24,No.7?497?文章编号:1001—5914(2007)07—0497—04基质金属蛋白酶一9参与吸烟所致气道黏液高分泌的信号转导通路李国庆,周向东【论着】摘要:目的研究基质金属蛋白酶一9(matrixmetalloproteinase.9,MMP.9)在香烟所致气道黏液高分泌中的作用及其信号转导机制.方法培养人气道BEAS一2B上皮细胞系,分别给予香烟烟雾提取物(cigarettesmokeextract,CSE)和外源性表皮生长
2、因子(epidermalgrowthfactor,EGF)刺激,以MMP一9抑制剂I(MMP一9inhibitorI)为干预因素.采用RT-PCR检测黏蛋白(mucin,Muc)5AcmRNA,以Westernblot检测MMP-9蛋白及磷酸化表皮生长因子受体(p.EGFR)蛋白含量,以ELISA检测MUC5AC蛋白及EGF蛋白含量,以明胶酶谱法测定细胞上清液中MMP.9活力.结果以5%,10%,20%CSE染毒后,MUC5AC的基因转录和MUC5AC蛋白含量显着高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01),且呈现与CSE染毒浓度相关的趋势;同时,10%,20%CSE染毒组伴有MMP
3、一9蛋白含量及MMP.9明胶酶活力增高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).20%CSE染毒能增加EGF蛋白,p-EGFR蛋白,MUC5AC蛋白含量及MUC5AC的基因转录,MMP9inhibitorI能显着下调CSE染毒引起的上述变化,与单纯CSE染毒组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但MMP-9inhibitorI不能下调外源性EGF刺激引起的p-EGFR蛋白,MUC5AC蛋白含量和MUC5AC基因转录水平增加的效应(/9>0.05).结论在香烟所致气道黏液高分泌过程中,MMP-9能水解产生可溶性EGF,后者结合并磷酸化EGFR,从而启动下游信号通路,
4、增加MUC5AC基因转录和蛋白产物生成.关键词:空气污染物;香烟烟雾提取物;基质金属蛋白酶.9;表皮生长因子受体;黏蛋白5AC中图分类号:R994.6文献标识码:ARoleofMatrixMetalloproteinase-9inSignalTransductionPathwayofCigaretteSmoke-inducedAirwayMucousHypersecretionLIGuo—qing,ZH()Xiang-dong.DepartmentofRespiratoryMedicine,刀lPSecondAffiliatedHospital,ChongqingMedicalUniversi
5、ty,Chongqing400010,ChinaAbstract:ObjectiveTodeterminetheinvolvementofmatrixmetallopmteinase.9fMMP.91inthesignaltransductionpathwayofcigarettesmoke—inducedairwaymucoushypersecretion.MethodsThewellculturedBEAS.2BairwayepithelialcellswereincubatedwithdifferentconcentrationsofcigarettesmokeextractfCSE).
6、alsosomecellswerepreincubatedwithMMP.9inhibitorIbeforeCSEorexogenousepidermalgrowthfactor(EGF1wasadded.Themucin(MUC)5ACmRNAlevelwasanalyzedbyRT—PCR,MMP一9andthephosphorylatedEGFR(p—EGFR)proteinproductionwasassayedbywesternblot,MUC5ACproteinandEGFpmteinweredetectedbyenzyme—linkedimmunosorbentassayresp
7、ectively.andgelatinzymographywasusedtodeterminetheactivityofMMP-9.ResultsIncubationofBEAS.2BcellswitIlCSEup-regulatedMUC5ACgeneexpressionandproteinproductioninadosedependentmanner(Pl<0.01),theactiv
