tcaia sh005-2015 动物源性食品中呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑酮的测定 酶联免疫吸附法

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1、T/CAIA中国分析测试协会标准T/CAIA/SH005-2015动物源性食品中呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑酮的测定酶联免疫吸附法Determinationoffurazolidonemetabolite3-amino-2-oxalidinoneresiduesinanimaloriginalfood—Enzymelinkedimmunosorbentassaymethod2015-12-30发布2016-04-01实施中国分析测试协T/CAIA/SH005-2015前言本标准按照GB/T1

2、.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由中国分析测试协会标准化委员会提出并归口。本标准起草单位：北京勤邦生物技术有限公司本标准主要起草人：罗晓琴、朱亮亮、杨昌松、万宇平、贾芳芳、冯静、崔海峰、刘玉梅1T/CAIA/SH005-2015动物源性食品中呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑酮的测定酶联免疫吸附法1范围本标准规定了动物源性食品中呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑酮（3-amino-2-oxalidinone，AOZ）的酶联免疫吸附（ELISA）测定方法

3、。本标准适用于鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝、鱼肉、虾肉等动物源性食品中呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-噁唑酮的测定。其他食品可参照执行。本标准的方法检出限为0.10μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法3原理和方法提要本方法为间接竞争ELISA方法。2-硝基苯甲醛与试样中的3-氨基-2-噁唑酮反应生成3-(2-硝基苄

4、叉氨基)-2-唑烷酮（2-NP-AOZ），酶标板微孔中包被有2-NP-AOZ抗原，与试样中的2-NP-AOZ抗原特异性竞争抗2-NP-AOZ抗体，加入酶标二抗，通过显色液进行显色，试样中2-NP-AOZ的含量与相对吸光度值成反比。用酶标仪测定450nm波长下吸光度，配合分析软件计算试样中呋喃唑酮代谢物的含量。4试剂和材料以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯试剂，水符合GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.12-硝基苯甲醛（NO2C6H4CHO）：纯度不小于98.00%。4.1.2甲醇（

5、CH3OH）。4.1.3乙酸乙酯（CH3COOC2H5）。4.1.4正己烷（CH3CH2CH2CH2CH2CH3）。4.1.5三水合磷酸氢二钾（K2HPO4•3H2O）。34.1.6盐酸（HCl）：ρ=1.18g/cm。2T/CAIA/SH005-20154.1.7氢氧化钠（NaOH）。4.1.8吐温-20（C18H34O6•(C2H4O)20）。4.1.9二水合磷酸二氢钠（NaH2PO4•2H2O）。4.1.10十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）。4.1.11过氧化脲（CO(NH

6、2)2•H2O2）。4.1.12四甲基联苯胺盐酸盐（C16H20N2•2HCl）。34.1.13硫酸（H2SO4）：ρ=1.84g/cm。4.2溶液配制4.2.1衍生化试剂：称取15.10mg2-硝基苯甲醛，加10.00mL甲醇溶解，混匀。4.2.2磷酸氢二钾溶液0.50mol/L：称取114.00g三水合磷酸氢二钾，加水定容至1000mL，混匀。4.2.3盐酸溶液0.30mol/L：量取12.45mLρ=1.18g/cm3的盐酸，加水定容至500mL，混匀。4.2.4氢氧化钠溶液1.00mol

7、/L：称取4.00g氢氧化钠，加水定容至100mL，混匀。4.2.5磷酸盐缓冲液0.20mol/L：准确称取25.80g十二水合磷酸氢二钠、4.36g二水合磷酸二氢钠，量取5.00mL吐温-20，加水定容至500mL，pH值为7.2。于2℃~8℃避光能够保存1个月。4.2.6磷酸盐缓冲液0.02mol/L：用水将0.20mol/L磷酸盐缓冲液（4.2.5）按9:1体积比进行稀释，用于酶标板洗涤。于2℃~8℃避光能够保存1个月。4.2.7磷酸盐缓冲液0.10mol/L：准确称取12.90g十二水合

8、磷酸氢二钠、2.18g二水合磷酸二氢钠，加水定容至500mL，pH值为7.6。于2℃~8℃避光能够保存1个月。4.2.8磷酸盐缓冲液0.05mol/L：用水将0.10mol/L磷酸盐缓冲液（4.2.7）按1:1体积比进行稀释，用于鸡肉、猪肉、鱼肉和虾肉提取试样的溶解。于2℃~8℃避光能够保存1个月。4.2.9磷酸盐缓冲液0.025mol/L：用水将0.10mol/L磷酸盐缓冲液（4.2.7）按3:1体积比进行稀释，用于鸡肝和猪肝提取试样的溶解。于2℃~8℃避光能够保存1个月。4.2.10显色液：