死亡受体dr5在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义论文

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1、死亡受体DR5在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义论文.freelia，nonlymphocytic，acute;deathdomainAbstract:AIMTorevealtheexpressionofdeathreceptor5（DR5）inthecellsofacutenon-lymphocyteleukemia（ANLL）anditsclinicalsignificance.METHODSANLLcelllineJurkatandNB4cellsarromunohis-tochemicalstainingmethod.Induci

2、ngchemotherapyotherapyresults.RESULTSDR5positivityrateainlylocatedinmembraneandcytoplasm，81%inNB4cells，andsignificantlydifferentinANLLpatients，rangingfrom94%to45%.DR5positivityratearycelltoinfantilismcell，andposi-tivelycorrelatedissionrateafterinducingchemotherapy，andightprovid

3、eclinicalsignificanceforassessingthetherapeuticeffectsofin-ducingchemotherapyforANLL.0引言死亡受体（DeathReceptor）结构上属于肿瘤坏死因子（TNF）受体超家族成员，是与相应配体结合后可导致死亡受体表达细胞凋亡的一类跨膜受体［1］，包括Fas，TNFR1，DR3，DR4，DR5等.DR4与DR5共用的配体TNF相关的凋亡诱导配体（TRAIL）是新近发现的一类TNF超家族成员.TRAIL可以选择性杀伤突变细胞而不杀伤正常细胞，但必须以和DR结合的方式发挥其特

4、有的功效［2，3］.其中DR5在正常组织中表达较广泛，如睾丸、卵巢、结肠、小肠，肝、脑、肺、脾和外周血白细胞等均有表达.近来有研究报道DR5在某些肿瘤细胞中有表达，其表达水平可能与瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性有关［4］，但在急性白血病中的表达情况尚未见报道.我们就DR5在急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）细胞系和患者肿瘤细胞中的表达及临床意义进行探讨研究.1材料和方法1.1材料白血病细胞株Jurkat，NB4由本科实验室提供.白血病原代细胞取自本院血液科12（男5，女7）例ANLL患者骨髓细胞，患者年龄9～67（平均43±11）岁;M21例，M

5、36例，M41例，M51例，M62例，M71例，正常对照5例.其骨髓细胞按常规制备成单个核细胞.主要试剂:RPMI-1640培养基购自西安华美生物公司，为美国GIBCO公司产品;DR5鼠抗人mAb为第四军医大学西京医院免疫学教研室惠赠;免疫组化SABCEnvision试剂盒购自武汉博士德公司，为丹麦DAKO公司产品.1.2方法1.2.1ANLL细胞系和培养条件ANLL细胞系Jurkat，NB4在含有100mLL-1胎牛血清、2mmolL-1谷氨酰胺的RPMI-1640培养液中、37℃，50mLL-1CO2、饱和湿度下培养，倒置显微镜下观察细胞形态.4

6、8～72h传代1次，调整细胞密度为5×108～1×109L-1，实验选用对数生长期细胞.1.2.2骨髓单个核细胞分离抽取ANLL患者及正常对照人群骨髓5mL（肝素抗凝），用5mLRP-MI1640培养液稀释，加于淋巴细胞分离液中（分离液与分离样品体积比为1∶1），2000rmin-1，离心20min，收集分离液中界面的单个核细胞，用RPMI-1640洗涤2次，调整细胞密度为5×108L-1，待用.1.2.3免疫组化染色①载玻片处理:用20mLL-1丙酮稀释液浸泡干净玻片30min，取出干燥5min，纯丙酮涮洗2～3次，然后置无尘处干燥，封闭保存;②制

7、备骨髓单个核细胞涂片:将分离的单个核细胞50μL滴到玻片上，铺片，丙酮室温固定10min，晾干备用;③免疫组化检测:切片经常规脱蜡至水，30mLL-1过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，小牛血清封闭，鼠抗人DR5mAb（一抗）孵育，4℃过夜，其余步骤按免疫组化Envision试剂盒的说明进行.免疫组化以PBS替代一抗为空白对照，抗5-HT多抗替代一抗为阴性对照.1.2.4结果分析免疫组化图像输入自动图像分析仪，每张切片按随机数字法选取6个视野，计算DR5阳性表达细胞数.诱导治疗结果评定:经三尖杉酯碱（2～6mgm-2，5～7d）、阿糖胞苷（100mg～20

8、0mgm-2，5～7d）或柔红霉素（30～70mgm-2，3d）、阿糖胞苷100～200mgm-2，7d）方