呼吸缺陷型耐糖耐高温酒精酵母菌种的筛选

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1、呼吸缺陷型耐糖耐高温酒精酵母菌种的筛选第13卷第3期2009年6月生命科学研究bfeScienceResearchVo1.13Noi3June20o9呼吸缺陷型耐糖耐高温酒精酵母菌种的筛选兰钊,唐美琼,韦珂,马光庭(广西大学农学院应用微生物研究所,中国广西南宁530005)摘要:采用紫外诱变和2,3,5.氯化三苯基四氮唑(Trc)鉴别性培养基,从市售酒精活性酵母粉中分离出l3株呼吸缺陷型突变株.通过进一步筛选,最终筛选出一株呼吸缺陷型耐糖,耐高温的高效酒精酵母茵株,编号为T11.该茵株茵落表面湿润,乳白色,小且圆;细胞椭圆形(2.5～5.0×3.75～

2、6.25),出芽繁殖,在25%(W/V)葡萄糖发酵液,起始pH5.5,40℃条件下发酵,酒精发酵产酒精率和糖利用率分别可达45.54%和98.01%.关键词:酒精酵母;呼吸缺陷型;耐糖;耐高温;筛选中图分类号:Q319'-2文献标识码:A文章编号:1007.7847(2009)03.0199-05ScreeningofRespiration—deficientSaccharomycescerevisiaeStrainswithSugar—andThermo-tolerancesLANZhao,TANGMei—qiong,WEIKe,MAGuang—ri

3、ng(IntituteofAppliedMicrobiologyofA~utture,GuangxiUnwe~,Nanning530005,Gmmgxi,China)Abstract:ThirteenrespirationdeficiencymutantswereseparatedbyusingUVandTI"Cidentificationmedium.Saccharomycescerevisiaestrainswithsugar—andthermo.tolerances(serialnumberT11wasselectedfurther.ThesuI

4、~aceofthisstrainiSmoist,milky,smal】andround,thecelliSoval,buddingbreeding.Theratioofalcoholproductionandutilizationreachedto45.54%and98.01%undertheconditionof40℃,pH5.5,25%sugar.Keywords:Saccharomycescerevisiae;respirationdeficiency;sugar—resisting;thermotolerance;screening(LScie

5、nceResearch,2009,13(3):199～203)酵母在酒精发酵工业中具有举足轻重的作用,筛选呼吸缺陷型耐糖耐高温酒精酵母,对提高酵母菌在酒精发酵过程中的耐高温,耐酒精和耐渗能力,适应浓醪高效酒精发酵的要求,实现酒精发酵工业的高效,节能,减排具有重要意义[1工].呼吸缺陷型酵母菌株是酵母中丧失呼吸能力的突变体,其对非发酵性底物如酒精,醋酸,甘油等不能氧化,酒精脱氢酶活力比野生型高;耐糖耐高温酵母可以减少浓醪酒精发酵过程中因高温高糖和产生的高浓度酒精而受到抑制,有利于提高酒精发酵效率,节能降耗,大幅度提高生产效益N,5].筛选呼吸缺陷型酵母菌

6、株常采用TYC(2,3,5.氯化三苯基四氮唑)显色鉴别快速筛选,Trc是一种显色剂,能与氧气竞争呼吸链中的还原氢[H】,其还原产物三苯基甲腈(TF)以红色结晶存在于细胞内,使呼吸正常的酵母呈红色,而呼吸链发生突变的酵母菌因缺少[H】而不能与2,3,5.氯化三苯基四氮唑(1Trc)结合生成三苯基甲腈(TF)而呈白色,.收稿日期:2009.02.20;修回13期:2009.04—19基金项目:广西自然科学基金项目(桂科自0339006);广西大学科研基金项目(DD16o058)作者简介:兰钊(1984.),男,广西忻城人,硕士研究生,主要从事木薯质淀粉生料

7、酒精发酵的研究;通讯作者:马光庭(1942.),男,江苏如皋人,广西大学生命科学学院教授,博士,主要从事资源与环境微生物学研究,Tel:0771-3238202,E—mail:mgt7828@sina.corn.生命科学研究2009年本研究试图通过紫外诱变和TFC鉴别培养基培养和耐糖,耐高温酒精发酵试验,快速筛选出呼吸缺陷型和耐糖,耐高温酒精酵母,为酒精和酿酒工业提供优良酵母菌种.1材料与方法1.1分离筛选试样采用市售酒精活性酵母粉作为分离筛选试样.1.2培养基呼吸缺陷型筛选培养基:CM培养基,TTC下层培养基,TYC上层培养基(参照参考文献[2]配制

8、,所采用葡萄糖均为C6I-I20?H20).酒精发酵基础培养基:CH06?H:0160g,(N