黄芩群体不同形态变异类型遗传多样性的aflp分析论文

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1、黄芩群体不同形态变异类型遗传多样性的AFLP分析论文杨全，罗烈伟，罗贵超，王文全，张卉【摘要】目的研究黄芩群体形态变异类型的遗传多样性。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术，对人工栽培群体的8个形态变异类型黄芩进行多态性分析。结果通过筛选得到9对AFLP引物组合，共扩增出2834个DNA条带，多态性条带为1332个.freelorphologicalvariationtypesinScutellariabaicalensisGeorgi.MethodUsingtheAFLPtechnology,thepoly

2、morphismsof8cultivatedvariationtypesinS.baicalensisGeorgiersscreened,2834DNAbandsplified,amongorphic.ThepolymorphiclocusorphologicalvariationtypesofS.baicalensisGeorgi,smallleaf,feontype,bigleaf,feauveflo,bigleaf,fe,.freelallleaf,multibranch,mauveflo,bigleaf,

3、multibranch,purpleflo,smallleaf,multibranch,mauveflo,smallleaf,multibranch,purplefloorphismamongmorphologicalvariationtypesandrichgeicdiversity.Keyorphologicalvariation;amplifiedfragmentlengthpolymorphism;geicdiversity黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi具清热燥湿、泻火解

4、毒、止血安胎等功效［1］，为常用中药材之一，是国家三级保护野生药材物种。近年来对黄芩药材的需求量剧增，导致野生资源被过度采挖，资源大幅减少。目前，人工栽培黄芩药材已经成为临床以及中成药原料的主要来源，但是，人工栽培黄芩由于种子混杂、退化等多种因素，不但药材的质量、产量差异较大［2-4］，而且群体中不同单株在茎颜色、株高、地茎、分枝数和叶片大小等农艺指标上存在显著差异［5］，严重影响了黄芩的大面积生产。本文采用扩增片段长度多态性（amplifiedfragmentlengthpolymorphism,AFLP）技术，

5、研究人工栽培群体不同形态变异类型黄芩在分子水平上的遗传变异，旨在揭示黄芩群体内的遗传多样性以及形态变异类型间的亲缘关系，为今后开展资源保存、种质鉴定奠定基础，同时有助于开展分子标记辅助选择育种研究。1材料与方法1.1试验材料黄芩为栽培于北京市通州区农业技术推广站农业科技成果示范基地的2年生人工栽培群体内的形态变异类型，变异类型的名称以及划分指标见表1，每个变异类型选择5个单株，每株取1～2个成熟叶片，混合在一起，置装有变色硅胶的封口袋内，迅速干燥，备用。表1黄芩形态变异类型命名一览表（略）Tab.1Alistofm

6、orphologicalvariationtypesofScutellariabaicalensisGeorgi注：普通类型为《中国植物志》所描述的植物形态类型1.2总DNA提取采用CTAB［6］法进行黄芩总DNA提取。用UItrospc2000紫外/可见分光光度计检测DNA的纯度及浓度。1.3AFLP分析接头、引物序列以及实验方案按照鼎国生物技术公司AFLP试剂盒的技术说明书进行。总DNA用PstⅠ和MseⅠ进行双酶切，然后加入PstⅠ和MseⅠ接头和T4DNA连接酶16℃连接过夜。酶切连接产物稀释10倍后用于A

7、FLP预扩增反应模板，预扩增反应条件为94℃/4min；94℃/40s；56℃/30s；72℃/80s；34个循环后，72℃延伸6min。预扩增产物稀释20倍后用于选择性扩增的模板。选择性扩增引物序列为PstⅠ和MseⅠ的核心引物序列加上3个选择性碱基。采用的引物组合为PstⅠ和MseⅠ引物组合。选择性扩增反应条件为：第一轮扩增参数94℃/4min；94℃/30s；65℃/30s；72℃/80s；以后每轮循环温度递减0.7℃，扩增13个循环；接着按照下列参数扩增24个循环：94℃/30s；56℃/30s；72℃/8

8、0s。1.4数据处理利用ABI377测序仪进行AFLP多态性分析，依据DNA电泳分子量标准（Marker）计算出各片段的大小。按片段记录带的有无，有记为1，无记为0。采用GeneScan3.1软件对图像进行处理，构建0、1数学矩阵；用NTSYSpc2.11F软件进行数据分析。对原始矩阵用SimQual程序求DICE相似系数，并获得相似系数矩阵。用SHAN程