汉黄芩素对移植人卵巢癌skov3细胞裸鼠组织端粒酶蛋白htert影响与凋亡相关性研究论文

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1、汉黄芩素对移植人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠组织端粒酶蛋白hTERT影响与凋亡相关性研究论文【摘要】目的评价汉黄芩素对移植人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠组织端粒酶蛋白hTERT影响与凋亡相关性。方法移植人卵巢癌SKOV3细胞的裸鼠随机分为5组：汉黄芩素高剂量组，低剂量组，空白对照组，常规化疗组（顺铂）和联合用药（顺铂+汉黄芩素）组。采用抗生素-生物素过氧化酶复合物（S-P）免疫组化法检测裸鼠组织中hTERT，Bcl-2，Bax蛋白及凋亡指数的表达。结果裸鼠组织经汉黄芩素作用后，随着汉黄芩素剂量的增大，对瘤体端粒酶hTERT蛋白表达有抑制作用.freeleraseactivation

2、isanidealorcells.ThisstudyaimedatevaluatingtherelationshipbeteraseactivationandapoptosisafterinistrationinnudemiceplantedhumanovariancancercellsSKOV3.MethodsNudemiceplantedhumanovariancancercellsSKOV3lydividedintofivegroups,includinghighdosegroup,loalcontrolgroup,cisplatintherapygroup,andb

3、inedtherapygroup(cisplatinandmunohistochemistry.ResultsTheresultsshoorparederaseactivationandtheeffectivenessor,theexpressionofBcl-2decreaseregularly,anditshoetendencyorandregulatetelomeraseactivation.Theeffectivenessisrelatedtothedoseofentoftumor.Itdoeraseacpaniedagesthestructureoftelomer

4、aseandsoroftheovary;Telomerase；Apoptosis端粒酶是维持端粒长度、确保肿瘤细胞不退出细胞周期而得以永生化的关键之一。85%的肿瘤细胞表达端粒酶活性，端粒酶的激活与肿瘤增殖密切相关，因此端粒酶成为治疗恶性肿瘤的一个理想的靶点。近年来寻找和研究端粒酶抑制剂是国内外研究的一个热点。本课题组前期研究汉黄芩素表明在体外它具有诱导卵巢癌细胞凋亡作用，能抑制端粒酶活性的表达［1］。本研究通过动物实验，观察汉黄芩素对肿瘤生长的抑制作用，并研究其对移植人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠组织端粒酶蛋白hTERT影响与凋亡的相关性。1材料1.1细胞人卵巢癌SKOV3细

5、胞由广西肿瘤防治研究所提供。培养于含10%的小牛血清，100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养液中，37℃，5%CO2培养箱中孵育培养、传代。1.2药物汉黄芩素是从黄芩根中分离出的一种单体，分子量为284kDa，黄色晶体，其化学性质、理化性质、光谱数据参见文献［2］。注射用顺铂（冻干型），齐鲁制药有限公司生产。1.3裸鼠裸鼠由上海斯莱克实验动物有限公司提供，4周龄，约20g左右，雌性，生产许可证SCXK（沪）2004-0005。2方法2.1动物分组及给药将对数生长期的人卵巢癌细胞SKOV3经胰酶消化后，制备成107/ml的细胞悬液，每只裸鼠腋部皮

6、下接种0.2ml，约2周后接种原位出现肿瘤，成功率为27/30。选取其中25只裸鼠随机分为5组即：汉黄芩素高剂量A组600mg·kg-1·d-1；低剂量B组300mg·kg-1·d-1；常规治疗C组腹腔注射顺铂3mg·kg-1·d-1；联合用药D组同时用腹腔注射顺铂3mg·kg-1·d-1和灌胃给药600mg·kg-1·d-1；空白对照E组灌生理盐水10ml·kg-1·d-1；采用灌胃给药开始治疗，共用药10d。停药7d后处死所有裸鼠，取瘤块并分成约0.1g/份，福尔马林固定，石蜡包埋。常规HE染色。2.2检测裸鼠组织中hTERT，Bcl-2,.freel，55℃烤片过夜，

7、常规脱蜡，高压修复抗原，PBS洗涤3次。3%H2O2孵育，室温5～10min，H2O2要覆盖组织，PBS洗涤3次，滴加1:100的1抗，孵育1h。PBS洗涤3次。滴加生物素标记的第2抗体，37℃，10～15min，PBS洗涤3次。DAB显色，用中性树脂封片。对照设置：阳性对照片染色步骤同上述；阴性对照片用PBS代替一抗；其余步骤同上。2.3检测裸鼠组织中凋亡指数表达(TUNEL法)组织切片，常规脱蜡，20μg/ml的蛋白酶K室温下消化20min，PBS洗5min×3次。3%H2O2甲醇液阻断内源性过氧化物酶20mi