应用pva构建妊娠相关血浆蛋白a固相时间分辨荧光

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1、应用PVA构建妊娠相关血浆蛋白A固相时间分辨荧光［摘要］目的：合成(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物，并用于构建妊娠相关血浆蛋白A固相时间分辨免疫荧光试剂。方法：用PVA作为载体结合BCPDAEu3+和生物素亲和素，以双抗体夹心法原理，结合生物素标记抗体和包被抗体建立PAPPA时间分辨免疫荧光试剂，并进行方法学评价。结果：成功的合成了活性的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物，构建PAPPA试剂检测灵敏度为0.7mIU/L；批内变异

2、系数在3.89%～4.96%之间,批间变异系数在7.35%～9.27%之间。结论：合成的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物较高的反应活性，可以用于多种试剂的构建。构建的PAPPA试剂灵敏度高，具有潜在的临床应用价值。　　［关键词］妊娠相关血浆蛋白A；固相时间分辨荧光免疫；亲和素—生物素—聚乙烯胺—4,7二氯磺苯基1，10啡罗啉2，9二羧酸—铕复合物；唐氏综合征　　DevelopADirectSolidPhaseLanthaneTimeresolvedFluoro

3、immunoassayReagentofPAPPAutilizingPVA　　Abstract:ObjectiveTodevelopadirectsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassayreagentofPAPPAbysynthesizingaplexof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+.MethodsPolyvinylamine(PVA)chelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,

4、10phenanthroline2,9dicarboxylicacid(BCPDA).UsinglabeledPVAplex,munoassayofPAPPAandevaluatedassaycharacteristicsofPAPPAkit.ResultsitsachievedIU/L.ThecalibrationcurveIU/L.Intraandinterassayimprecision(CV)aproteinA;Directsolidphaselanthanetimeresol

5、vedfluoroimmunoassay;StreptavidinbiotinPolyvinylamineeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid;Doe　　妊娠相关血浆蛋白A(PregnancyassociatedplasmaproteinA，PAPPA)是一种高分子α2糖蛋白，20世纪70年代在孕妇血清中被发现［1］。在孕妇血中主要PAPPA是胎盘滋养层组织分

6、泌，它是一种异源四聚体，由两个分子量为200000~250000亚基构成。PAPPA亚基和两个嗜红细胞主要基础蛋白(Proformofeosinophilmajorbasicprotein)以二硫键结合而成［2］，在孕妇血中只存在微量游离单体PAPPA。PAPPA亚基由1547个多聚核苷酸构成，包括1个拉长的锌指结构，3个Lin—notch重复序列，以及5个短一致重复序列［3］。在体内PAPPA是一种蛋白酶，主要针对胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)和胰岛素样生长因子结合蛋白5(IG

7、FBP5)起作用。胰岛素样生长因子I(IGFI)在促进细胞分裂和增殖起重要作用，它主要通过IGF1受体起作用，IGFI、II的生物活性受6个高亲和性IDFBP调节［4，5］。PAPPA主要用于产前筛查唐氏综合征(Doe，DS)，迄今医学上对此病尚无有效的治疗和预防措施，只能通过产前筛查防止DS儿的出生，但目前开展的绒毛活检,羊水穿刺及脐带血穿刺均为侵入性检查,有1%～3%的流产率,且方法繁琐,出报告时间长,不适宜大范围孕妇的普查,仅限于高危人群的诊断。大量报道认为PAPPA可作为DS胎儿产

8、前筛查的的标志物。在15周～20周通过结合孕妇孕周、超声诊断和FreeβHCG可以鉴别65%～75%，但要在3个月～6个月结合AFP、游离E3以及抑制素上述成分可鉴别85%～90%［6］。有文献［7］报道PAPPA在急性冠状动脉综合征(ACS)的早期诊断有一定的意义，PAPPA在ACS患者血清含量＜30mIU/L，同时结构不同于孕妇体内的PAPPA且存在动态变化，必须利用超灵敏的方法进行检测。国内PAPPA的诊断试剂大多为ELISA和Perki