水蒸气蒸馏和超临界萃取薰衣草精油抗氧化作用研究论文

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1、水蒸气蒸馏和超临界萃取薰衣草精油抗氧化作用研究论文刘婷，厍文波，王婷，付伟，郑秋生，李刚，马成俊，王振华【摘要】目的采用水蒸气蒸馏和二氧化碳超临界萃取方法提取薰衣草精油.freelethodsandparetheirantioxidativeactivitiesinvitro.MethodsThelavenderoildistillationmethodandsupercriticalCO2extractionmethod.TheantioxidativecapacityoflavenderoilinedthroughDPPH,.freelolysis

2、reactingsystem.ResultsBothofthelavenderoilsbydifferentextractionmethodhadstrongantioxidativecapacityinconcentration-dependentmanner.的PBS（pH=7.4），加入30μl的蒸馏水，充分混匀后，加入30μl0.75mmol/L的硫酸亚铁，混匀后，再加入30μl的1%的H2O2混匀。37℃的水浴中60min后，在536nm处，测定吸光度为A损；未损伤管：以30μl的蒸馏水代替H2O2重复上述操作，在536nm处，测定吸光度为A

3、未损；样品管：以30μl的样品代替30μl的蒸馏水重复损伤管组操作，在536nm处，测定吸光度为A样；样品参比：60μl0.15mol/L的PBS中加30μl的样品，充分混匀后，加入90μl的蒸馏水，在536nm处测定吸光度为A参；空白参比：60μl0.15mol/L的PBS加入120μl的蒸馏水，在536nm处测定吸光度为A空。·OH清除率（%）=［（A样-A参-A损+A空）/（A未损-A损）］×100%2.4超氧阴离子生成抑制能力测定取浓度为0.05mol/L的Tris-HCl（pH=8.2）缓冲液100μl，25℃预热20min后，加入50μl不

4、同浓度的薰衣草精油，立即加入40μl的3mmol/L的邻苯三酚，振荡使之充分反应，4min后，用10μl的3mol/L的HCl终止反应，在325nm处测定吸光度（A1），平行测定3次。模型对照组（A0）用50μl的蒸馏水代替样品液。空白对照组（A2）用40μl的蒸馏水代替邻苯三酚。O-2·抑制率（%）=［（A0-A1+A2）/A0］×100%2.5卵黄脂质过氧化抑制能力测定卵黄悬液的配制：卵黄用等体积的pH=7.4的0.1MPBS配成1∶1悬液，并用磁力搅拌器搅拌10min（置于冰箱中4℃）备用，使用前用PBS稀释成1∶25的悬液。吸取1∶25的卵黄悬

5、液20μl,加入20μl的不用浓度的薰衣草精油，再加入20μl的25mmol/L的FeSO4，用pH=7.4，0.1mol/L的PBS补至200μl,37℃振荡15min，取出后再加入50μl的20%的三氯乙酸，4000r/min离心8min，吸取100μl上清液加入50μl0.8%TBA，封口，沸水浴中煮15min，在532nm处测吸光度，平行测定3次。以不加样品管的吸光度为A0。以样品加PBS管的吸光度为A样。抑制率(%)=［（A0-A+A样）/A0］×100%2.6红细胞溶血实验取新鲜大鼠血液，加入备有肝素钠的离心管中，制成抗凝血，3000r/m

6、in离心10min，弃上清液，用PBS（pH=7.4)洗涤，3000r/min离心10min，重复2次，得到压积红细胞，以PBS（pH=7.4）将压积红细胞配成2.5%混悬液。各取100μl2.5%红细胞悬液，加入不同浓度样品溶液50μl，加入100μl的0.5mmol/L氢过氧化枯烯，37℃温孵3.5h，3000r/min离心10min，取上清液测定OD710(A)；取100μl的红细胞加50μl的PBS,100μl的蒸馏水，作为完全溶血的对照，同样处理，测定OD710(B)。按公式(A/B)×100%计算溶血的变化。2.7统计分析所有数据用±s表示

7、，采用SPSS10.0软件包，进行单因素方差分析及t检验。3结果3.1薰衣草精油的外观状态与得率水蒸气蒸馏法制备的薰衣草精油为微黄色澄清油状液体，香气柔和，得率在0.7%～0.9%。超临界CO2萃取法制备的薰衣草精油为深黄色微浑浊油状液体，香气较浓烈，近似真花香，得率在3.1%～4.2%。3.2DPPH·清除能力测定人工合成的DPPH是少数化学性质稳定的自由基之一，其乙醇溶液呈深紫色，在517nm附近有强吸收峰。当DPPH·溶液中加入自由基清除剂时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数成定量关系。因而可用比色法进行定量分析，

8、评价样品的抗氧化能力［7］。如图1所示，两种方法提取的薰衣草精油都有一定的清除DPPH能力，清