脑缺血性损伤后的皮层突触再生与运动功能恢复论文

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1、脑缺血性损伤后的皮层突触再生与运动功能恢复论文.freelia;postsynapticdensity;motorfunctionAbstract:AIMToevaluatethedistributionanddensityofexpressionofproteinsknootorfunctionofforelimbsafterfocalis-chemiainrats.METHODSUnilateralcerebralischemiaiddlecerebralarteryocclusion（MCAO）

2、.SynaptophysinandPSD-95inedbyim-munohistochemicaltechniques.Forelimbsfunctionulationtest.RESULTSBothsynapto-physinandPSD-95demonstratedstatisticallysignificantin-creaseinthedensityofimmunoreactionintheneocorticalre-gionsmedialandlateraltotheinfarctionas

3、con-trols.Meanbsfunctionrecoveryhasstatisticallysignificantincreasedat21thday.CONCLUSIONChangeofneocorticalstructureiddlecerebralarteryocclusion，MCAO）模型.用一细的线栓通过颈总动脉插入颈内动脉，并顺着颈内动脉向颅内推进18～23mm，即可造成大脑中动脉的完全阻断.神经症状评定分级:O级:未见行为缺陷;1级:前肢屈曲（即提尾悬空试验阳性）;2级:侧推抵抗力

4、下降;伴前肢屈曲，无转圈行为;3级:同2级行为，伴自发旋转.手术组对照组的手术过程除不阻断动脉血流外，其余步骤均同手术组.1.2行为测试采用触觉刺激试验（tactilstimula-tiontest），方法为:对所有对照组大鼠及术后第7，14，21，28日的大鼠，在固定时间.将0.5cm×0.5cm的医用胶布粘于大鼠两前爪腹侧面后，送入观察箱中，记录其撕去胶布所使用的时间.1.3灌注与免疫组织化学染色各观察时间点的大鼠，用10gL-1戊巴比妥钠（30mgkg-1，ip）麻醉，40gL-1的多聚甲醛灌注

5、固定，取大脑标本，连续冠状面切片，片厚40μm，0.01molL-1KPBS清洗10min×3→浸入含3mLL-1Triton×100的0.01molL-1KPBS液中30min→0.01molL-1KPBS清洗10min×3→分别入突触素（SynaptophysinSYN1∶1000Sigma）或突触后致密物质（Postsynapticdensity-95PSD-951∶1000SantaCruzBiotech，INC）一抗溶液，4℃下孵育24～48h;取出入0.01molL-1KPBS清洗10mi

6、n×3→分别入相应的二抗溶液（SYNRabbitA-Rabbit1∶400;PSD-95RabbitA-Goat1∶200），室温下孵育2h→0.01molL-1KPBS清洗10min×3→浸入ABC复合物（1∶400Santa），室温下孵育2h，硫酸镍胺加强的DAB蓝色反应法呈色，同时用0.01molL-1KPBS取代一抗做空白对照.贴片、脱水、透明、中性树胶封片.光镜观察.以LeicaQ570C真彩色图象分析仪进行灰度定量分析，在损伤的内、外、对侧分别选5个高倍视野取测定数值减去背景测定数值的绝对

7、值进行阳性物质密度值统计学分析，所有数据用x±s表示，两样本均数用t检验比较.2结果2.1行为学测试大鼠前肢的功能在MCAO之后的第7日较之对照组明显降低，第14日有所恢复，于第21日较之损伤后恢复显著（P0.01），并基本接近正常（Tab1）.表1大鼠前肢触觉刺激试验（略）2.2突触素（synaptophysin，SYN）免疫反应产物的分布在MCAO术后的第7日于梗塞区内、外和对侧顶叶皮质的SYN免疫反应复合物较之对照组明显减少，从第14日起及以后的几周这些部位的SYN显著增加（P0.01，Tab2

8、）.对照染色均无SYN免疫反应复合物的出现.2.3突触后致密物质┐95（postsynapticdensity┐95，PSD┐95）免疫反应产物的分布与突触素的结果相似，PSD-95的免疫反应复合物在MCAO术后的第7日在梗塞区内、外侧和对侧顶叶皮质较之对照组明显减少，从第14日起以及以后的几周这些部位的PSD-95显著增加（P0.05，Tab2）.对照染色均无PSD-95免疫反应复合物的出现.表2不同时间点在大鼠皮层不同部位突触素免疫反应复合物的灰度值